[發(fā)明專利]豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810074696.0
• 申請(qǐng)日: 2018-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN108330134B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵軍軍;常惠蕓;李楊帆;張永光
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/62
• 分類號(hào): C12N15/62;C07K19/00;C12N15/70;A61K39/135;A61K47/68;A61P31/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種編碼豬口蹄疫病毒O型Fc多肽的核苷酸，其特征在于，所述的核苷酸如SEQ IDNO.1所示。

2.權(quán)利要求1所述的核苷酸在表達(dá)獲得豬口蹄疫病毒O型Fc多肽中的用途。

3.一種豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗，其特征在于，所述的多肽疫苗中含有SEQ IDNO.1所示的核苷酸經(jīng)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)得到的可溶性豬口蹄疫病毒O型Fc多肽。

4.如權(quán)利要求3所述的豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗，其特征在于，所述的原核表達(dá)系統(tǒng)為大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)。

5.如權(quán)利要求3所述的豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗，其特征在于，所述的多肽疫苗中還含有佐劑。

6.一種制備權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）獲得SEQ ID NO.1所示的編碼豬口蹄疫病毒O型Fc多肽的核苷酸；

（2）將獲得的編碼豬口蹄疫病毒O型Fc多肽的核苷酸插入原核表達(dá)載體pET-28a(+)中構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)進(jìn)行陽性篩選，得到陽性重組表達(dá)質(zhì)粒，-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>

（3）將步驟（2）得到的陽性重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)，從LAB平板挑單克隆接種含卡那霉素的無菌LB培養(yǎng)液，于37℃培養(yǎng)箱220rmp過夜培養(yǎng)，將過夜培養(yǎng)物加入新制備的含卡那霉素的無菌LB培養(yǎng)液中，于30℃培養(yǎng)箱220rmp培養(yǎng)至OD600為0.4~0.6時(shí)，于超凈臺(tái)無菌條件下加入0.4mM的IPTG于30℃ 220rmp誘導(dǎo)表達(dá)4~6小時(shí)，離心收獲培養(yǎng)物；

（4）向原培養(yǎng)物中加入蛋白裂解液，冰浴條件下進(jìn)行超聲破碎處理，離心收集上清，棄沉淀；

（5）從收集的上清中獲得純化后的蛋白；

（6）將純化后的蛋白加入油佐劑乳化成疫苗制劑。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟（5）中使用Ni-NTA組氨酸純化柱進(jìn)行蛋白的純化。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟（6）中按照質(zhì)量比1：1的比例加入油佐劑Montanide ISA206乳化成疫苗制劑，每頭份1ml，其中含可溶性豬口蹄疫病毒O型Fc多肽200μg。

9.權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的豬口蹄疫病毒O型Fc多肽疫苗在制備預(yù)防豬口蹄疫藥物中的用途。