[發明專利]前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬細胞集落刺激因子制備方法有效
| 申請號： | 201810073775.X | 申請日： | 2018-01-25 |
| 公開（公告）號： | CN110079539B | 公開（公告）日： | 2022-07-01 |
| 發明（設計）人： | 陳國友 | 申請（專利權）人： | 上海惠盾因泰生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/62 | 分類號： | C12N15/62;C12N9/16;C12N5/10;C07K14/535 |
| 代理公司： | 上海一平知識產權代理有限公司 31266 | 代理人： | 肖艷;徐迅 |
| 地址： | 200120 上海市浦東新區中國（上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 前列腺 酸性磷酸酶 巨噬細胞 集落刺激因子 制備 方法 | ||
1.一種用于編碼前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬細胞集落刺激因子PAP/GM-CSF的核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子編碼SEQ ID NO.: 1所示的氨基酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.: 2所示。
2.一種載體，其特征在于，所述載體含有如權利要求1所述的核苷酸分子。
3.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有權利要求2所述的載體或其染色體中整合有外源的權利要求1所述的核苷酸分子，所述宿主細胞為CHO細胞。
4.一種重組前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬細胞集落刺激因子PAP/GM-CSF的制備方法，其特征在于，包括步驟：
(a)培養權利要求3所述的宿主細胞，從而表達重組融合蛋白前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬細胞集落刺激因子PAP/GM-CSF；和
(b)分離出表達的重組融合蛋白前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬細胞集落刺激因子PAP/GM-CSF。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(a)中，還包括將所述宿主細胞接種到培養基中，接種密度為2×105-3×105 細胞/mL。
6.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(a)中，所述重組融合蛋白的表達量在150 mg/L以上。
7.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(a)中，利用含有葡萄糖的培養基培養所述宿主細胞，并且培養過程中維持培養基中的葡萄糖濃度為4.5-5.5 mmol/L。
8.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述方法還包括步驟：(c)純化所述重組融合蛋白，所述純化包括：陰離子交換柱純化、分子篩柱純化、或其組合。
9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述純化包括通過Q Sepharose(HP)層析柱對所述重組融合蛋白進行純化。
10.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述純化還包括采用pH8.0，20mMTris/HCl 1M的NaCl梯度線性洗脫。
11.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述純化包括通過Superdex 200層析柱對所述重組融合蛋白進行純化。
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