[發(fā)明專利]東茛菪堿作為有毒蜂蜜的生物標(biāo)志物及其在鑒別有毒蜂蜜中應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810073018.2
• 申請(qǐng)日: 2018-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN108387650A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊術(shù)鵬;張靜;張金振;李熠;周金慧;金玥;袁媛;王鵬;趙文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;王璐

本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，具體公開了東茛菪堿作為有毒蜂蜜的生物標(biāo)志物及其在鑒別有毒蜂蜜中應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，常規(guī)認(rèn)知中曼陀羅的有毒物質(zhì)阿托品在曼陀羅源蜂蜜中的含量并不高，反而是東茛菪堿在毒性和含量上均超過阿托品成為曼陀羅源有毒蜂蜜的關(guān)鍵致毒成分，因此東茛菪堿尤其適用于曼陀羅源有毒蜂蜜的識(shí)別和鑒定，以及蜜蜂中毒人群的確證性診斷。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步提出了蜂蜜樣本中東茛菪堿的UHPLC?Q Exactive plus檢測(cè)分析方法，并對(duì)蜜蜂樣本的前處理?xiàng)l件和檢測(cè)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。本發(fā)明所提供的有毒蜂蜜的生物標(biāo)志物和檢測(cè)方法，對(duì)保護(hù)蜂蜜消費(fèi)者的生命健康和維護(hù)蜜蜂消費(fèi)行業(yè)的健康發(fā)展具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，具體地涉及東茛菪堿作為有毒蜂蜜的生物標(biāo)志物及其在鑒別有毒蜂蜜中應(yīng)用。

背景技術(shù)

蜂蜜是蜜蜂從開花植物的花中采得的花蜜與自身分泌物混合后，經(jīng)充分釀造存儲(chǔ)在蜂巢中食物。蜂蜜屬于傳統(tǒng)的天然甜味食品，除了含有較多的糖類物質(zhì)之外，還含有多種黃酮類、酚酸類、維生素、氨基酸及多種人類必須的微量元素，具有美容、養(yǎng)顏、安神等保健功能，深受廣大消費(fèi)者喜愛。然而，近年來我國(guó)多個(gè)地區(qū)陸續(xù)爆發(fā)了多起蜂蜜中毒事件，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2014-2017年，四年期間我國(guó)一共爆發(fā)了13起蜂蜜中毒事件，涉及的中毒人群高達(dá)95人，致人死亡的有15人，致死率高達(dá)15.8％，蜂蜜中毒事件對(duì)我國(guó)危害嚴(yán)重，已經(jīng)屬于嚴(yán)重的公共衛(wèi)生事件，受到全社會(huì)的關(guān)注。

曼陀羅屬于茄科的一年生草本有毒開花植物，廣泛分布于世界溫帶至熱帶地區(qū)，在我國(guó)各地均有分布。由于曼陀羅具有一定藥用和觀賞價(jià)值，催生了一些曼陀羅的大規(guī)模種植基地。曼陀羅作為已知的有毒蜜源植物，在其盛花期，當(dāng)其它蜜源植物匱乏，曼陀羅成為優(yōu)勢(shì)蜜源植物時(shí)，蜜蜂便會(huì)采集曼陀羅的花蜜釀制有毒蜂蜜。人一旦誤食，便會(huì)發(fā)生中毒反應(yīng)。有關(guān)曼陀羅蜂蜜中毒事件在國(guó)內(nèi)外均有相關(guān)報(bào)道，但是對(duì)于相關(guān)識(shí)別和鑒定方法缺乏系統(tǒng)的研究。

目前，曼陀羅源有毒蜂蜜致人中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不清楚。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)對(duì)曼陀羅的報(bào)道，人們普遍認(rèn)為，阿托品為曼陀羅有毒蜂蜜發(fā)揮毒性的重要成分(劉炳侖.我國(guó)14種有毒蜜源植物及其花粉形態(tài)(二).蜜蜂雜志,1995(03):23～25)。然而本發(fā)明發(fā)明人經(jīng)過對(duì)曼陀羅源有毒蜂蜜的大量研究發(fā)現(xiàn)，有毒蜂蜜中的阿托品含量?jī)H為0.21-1.34mg/kg，并不足以成為蜂蜜致毒的關(guān)鍵。因此，急需開展相關(guān)的科學(xué)研究，闡明曼陀羅源有毒蜂蜜的物質(zhì)基礎(chǔ)，找出其生物標(biāo)志物，并建立有毒蜂蜜的鑒別和檢測(cè)方法。這對(duì)于保障蜂蜜消費(fèi)者的生命健康和維護(hù)蜂產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)當(dāng)前采用花粉形態(tài)鑒別法識(shí)別和鑒定曼陀羅有毒蜂蜜的缺陷和不足，基于液相串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，識(shí)別和鑒定出了一種曼陀羅有毒蜂蜜的生物標(biāo)志物(東茛菪堿)，并采用UHPLC-HRMS建立了蜂蜜中東茛菪堿的檢測(cè)方法，用于曼陀羅有毒蜂蜜的識(shí)別與鑒定以及蜂蜜中毒人群的快速診斷。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。

本發(fā)明的技術(shù)方案之一是：建立了液相串聯(lián)高分辨質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行識(shí)別和鑒定蜂蜜樣本中阿托品類生物堿的方法。該方法采用UHPLC-Q Exactive Plus(超高效液相色譜-四級(jí)桿串聯(lián)高分辨靜電軌道阱)進(jìn)行檢測(cè)曼陀羅的花蜜及有毒蜂蜜，通過查看圖譜，采集的數(shù)據(jù)由軟件CD2.0進(jìn)分析處理，共識(shí)別和鑒定出了四種阿托品類生物堿，其中包含茛菪堿、山茛菪堿、東茛菪堿及N-去甲基山茛菪堿，其中東茛菪堿的含量最高，占到總生物堿的90％以上。鑒于東茛菪堿的高毒性(LD50<1.0mg/kg B.W.小鼠口服)及其在曼陀羅有毒蜂蜜中的高含量，將其作為曼陀羅有毒蜂蜜的生物標(biāo)志物。東茛菪堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示。