[發(fā)明專利]快速鑒定中華鱉遺傳性別的PCR擴(kuò)增引物、方法及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810072956.0
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108048579A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊鋼;王曉清;周先文;鄧灶福;康驪;曾丹;王佩
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南生物機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院;湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/686
• 代理公司: 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

一種快速鑒定中華鱉遺傳性別的PCR擴(kuò)增引物及方法，該引物序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，該鑒定方法是以待鑒定的中華鱉DNA為模板，利用前述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)973bp大小的條帶時(shí)，中華鱉個(gè)體的遺傳性別判定為雌性(即性染色體型為ZZ)；當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)1533bp大小的條帶和973bp大小的條帶，則中華鱉個(gè)體的遺傳性別判定為雄性(即性染色體型為ZW)。本發(fā)明同時(shí)提供含有前述引物的試劑盒。本發(fā)明簡便快速、成本低，為中華鱉遺傳性別標(biāo)記開發(fā)、遺傳性別鑒定、性別決定機(jī)制研究和人工控制中華鱉性別分化研究提供參考依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及中華鱉遺傳性別(性染色體型ZZ/ZW)鑒定領(lǐng)域，特別涉及一種能夠快速鑒定中華鱉遺傳性別的PCR擴(kuò)增引物、鑒定方法及試劑盒。

背景技術(shù)

中華鱉(Trionyx sinensis)是我國名貴水產(chǎn)品，其肉味鮮美、營養(yǎng)豐富、滋補(bǔ)力強(qiáng)，是我國重要的淡水養(yǎng)殖動物，產(chǎn)量位居世界首位。我國中華鱉商業(yè)養(yǎng)殖始于20世紀(jì)70年代后期，80年代是積累階段，90年代進(jìn)入穩(wěn)定的發(fā)展期，目前中華鱉養(yǎng)殖業(yè)已形成了大規(guī)模、有影響的特種水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)，其野生鱉市價(jià)仍達(dá)300元/Kg以上，養(yǎng)殖鱉市價(jià)也在80～120元/Kg。在中華鱉養(yǎng)殖過程中，雄鱉比雌鱉生長快25％～30％，且雄鱉裙邊寬厚、脂肪少，具有更高的營養(yǎng)價(jià)值，但雄鱉單價(jià)比雌鱉單價(jià)高20％。因此，若能養(yǎng)殖全雄鱉，可縮短養(yǎng)殖周期，顯著提高養(yǎng)殖產(chǎn)量和效益。

中華鱉性染色體型為ZZ(遺傳性別為雄性)/ZW(遺傳性別為雌性)。由于中華鱉生理性別除受遺傳性別(性染色體型)控制外，還受環(huán)境因素影響，因此在生產(chǎn)中我們常采用控制環(huán)境因素來調(diào)控中華鱉雄性比例，提高中華鱉養(yǎng)殖效益。因此中華鱉遺傳性別鑒定在中華鱉雄性化育種中是一種十分重要的技術(shù)手段。目前，國內(nèi)外研究人員圍繞中華鱉性別分化和控制開展了相關(guān)探索，現(xiàn)行研究中對中華鱉遺傳性別的鑒定主要利用性染色體Z/W形態(tài)差異采用組織切片觀察鑒定(王偉；錢國英；李彩燕等.2014)和對性染色體Z/W基因組差異基因采用熒光原位雜交(Badenhorst,D；Stanyon,R；Engstrom,T et.al.2013)鑒定。這兩種技術(shù)操作復(fù)雜、技術(shù)水平要求高、鑒定工作時(shí)間長、鑒定成本高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速鑒定中華鱉遺傳性別的PCR擴(kuò)增引物及方法，同時(shí)還提供快速鑒定中華鱉遺傳性別的試劑盒。

本發(fā)明利用中華鱉性染色體Z和性染色體W上的基因DNA差異片段長度不同的特點(diǎn)，在差異片段兩端設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物，對個(gè)體組織DNA樣體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，依據(jù)瓊脂糖電泳PCR產(chǎn)物的條帶差異進(jìn)行中華鱉遺傳性別(ZZ/ZW)鑒定。

具體地，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種快速鑒定中華鱉遺傳性別的PCR擴(kuò)增引物，該引物序列如下:

正向引物：5’-AGGGCTTGGCTATGAGGGAA-3’，見SEQ ID No.1，

反向引物：5’-TAAATTAGGACTGGAAGACACC-3’，見SEQ ID No.2。

本發(fā)明同時(shí)提供一種快速鑒定中華鱉遺傳性別的PCR方法，該方法是以待鑒定的中華鱉DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)973bp(見SEQ ID No.3)大小的條帶時(shí)，中華鱉個(gè)體的遺傳性別判定為雌性(即性染色體型為ZZ)；當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)973bp(基因片段序列SEQ ID No.3大小的條帶和1533bp(見SEQ ID No.4)大小的條帶，則中華鱉個(gè)體的遺傳性別判定為雄性(即性染色體型為ZW)。