[發明專利]一種低氧培養經血來源子宮內膜干細胞的方法

在審

• 申請號: 201810071059.8
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN110079496A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發明（設計）人: 左鳳瓊;楊嘉潔
• 申請（專利權）人: 左鳳瓊
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種低氧培養經血來源子宮內膜干細胞的方法，包括以下步驟(1)經血采集約10ml，立即轉移至裝有10ml標本保存液的50ml離心管中，混勻；(2)經密度梯度離心法分離子宮內膜干細胞；(3)將細胞接種于T25培養瓶中，加入配制好的完全培養基，混勻，并細胞計數；(4)待細胞的融合率達到80％以上時，胰蛋白酶消化，離心收集細胞；(5)按照適當密度將細胞傳代至多個T75培養瓶中繼續培養；(6)低氧培養條件：低氧培養的經血來源子宮內膜干細胞培養時CO₂濃度控制為5％，O₂濃度控制為1-10％(優選5％)，O₂濃度濃度降低通過N₂平衡，其它空氣中應有物質的含量與常規常氧培養箱中空氣含量一致；(7)常氧培養條件：常氧培養經血來源子宮內膜干細胞培養時CO₂濃度控制為5％，O₂濃度為21％。(8)傳至P3-10代后，胰蛋白酶消化細胞，離心收集細胞，計數并凍存。(9)P4代經血來源子宮內膜干細胞的分化功能和表面標志物檢測。

2.根據權利要求1，低氧培養條件氧含量為1-10％，優選5％作為其最佳低氧培養條件。

3.一種子宮內膜干細胞培養基配制方法：低糖DMEM與F12按比例混勻后加入終濃度為10％的替代血漿，加入慶大霉素(終濃度為100U/ml)、兩性霉素(終濃度為0.1mg/ml)。

4.一種經血標本保存液的配制方法：PBS緩沖液，分別加入終濃度200U/ml的慶大霉素，0.2mg/ml的兩性霉素，1.0mg/ml的EDTA-NA₂。