[發明專利]制備紐莫康定B0的發酵方法

有效

• 申請號: 201810070947.8
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108048512B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 曾靜;崔江銘;康偉松;李善佳
• 申請（專利權）人: 湖南唯創前沿科技有限公司
• 主分類號: C12P21/04
• 分類號: C12P21/04;C12R1/645
• 代理公司: 安化縣梅山專利事務所 43005
• 代理人: 夏贊希

本發明公開了一種制備紐莫康定B0的發酵方法，包括以下步驟：將菌種Glarea lozoyensis接種于裝有第一培養基的搖瓶中，培養得到菌源液；將菌源液接種于裝有第二培養基的發酵罐中；通過曝氣管向第二培養基中泵送無菌空氣；發酵至24h后，通過曝氣管向所述第二培養基中泵送含有氨氣的無菌空氣；發酵至60h后，通過插入所述第二培養基中的微生物培養板向所述第二培養基中流加甘露醇；發酵至72h后，收集發酵罐中的紐莫康定B0。本發明提供的技術方案能減小菌液粘稠度，獲得紐莫康定B0的產量高。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，尤其涉及制備紐莫康定B0的發酵方法。

背景技術

紐莫康定B0，又稱為紐莫康定B₀，是由霉菌Glarea lozoyensis發酵所得的次級代謝產物，紐莫康定B0主要用于合成藥物卡泊芬凈，卡泊芬凈是一種半合成脂肽(棘白菌素，echinocandin)化合物，能抑制許多絲狀真菌和酵母菌細胞壁的一種基本成份β(1,3)-D-葡聚糖的合成，從而使得真菌細胞壁破裂失去完整性以及細胞內外滲透壓發生變化，最終發揮抗真菌的作用。

Glarea lozoyensis發酵過程中除了產生紐莫康定B0外，還有產生A₀、C₀等組分，如何快速高效的培養Glarea lozoyensis，同時使得產生的次級代謝產物中紐莫康定B0含量比例最大，是制備紐莫康定B0產業化的關鍵。

在Glarea lozoyensis發酵過程，隨著絲狀真菌在其發酵過程中絲狀細胞不斷累積導致菌液濃度不斷升高，導致菌體和營養物質不能充分接觸或部分有害代謝產物累積過高，影響產量。

因此，有必要提供一種培養效率高、紐莫康定B0產量高的發酵方法。

申請內容

本發明所要解決的技術問題是，克服以上背景技術中提到的不足和缺陷，提供制備紐莫康定B0的發酵方法，以解決現有霉菌Glarea lozoyensis發酵菌液濃度過高影響紐莫康定B0產量的技術問題。

為解決上述技術問題，本發明提出的技術方案為：一種制備紐莫康定B0的發酵方法包括以下步驟：

步驟一、將菌種Glarea lozoyensis接種于裝有第一培養基的搖瓶中，培養得到菌源液；

步驟二、將所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養基的發酵罐中發酵，所述菌源液與所述第二培養基的體積比為3～5:100，向所述第二培養基中泵送無菌空氣，控制所述第二培養基中的溶氧量不低于45％，pH值為5.0～5.4，通氣量為0.5～1.0VVM，罐壓為0.04～0.06Mpa；

步驟三、待所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養基的發酵罐中發酵至24h后，向所述第二培養基中泵送氨氣，并控制pH值為5.0～5.4；

步驟四、待所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養基的發酵罐中發酵至60h后，通過插入所述第二培養基中的微生物培養板向所述第二培養基中流加甘露醇，流加速度為1.5～2.5％/天，使發酵液總糖濃度控制在1～3％之間，所述微生物培養板安裝有用于防止菌體在所述微生物培養板表面堆積的電極；

步驟五、待所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養基的發酵罐中發酵至13～15d后，收集發酵罐中的紐莫康定B0。

優選地，所述步驟一具體包括：

將菌種Glarea lozoyensis接種于裝有40～50ml第一培養基的250ml的搖瓶中，以180rpm～260rmp在搖床上培養2～3天后得到菌源液。