[發(fā)明專利]制備紐莫康定B0的發(fā)酵方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810070947.8
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108048512B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾靜;崔江銘;康偉松;李善佳
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南唯創(chuàng)前沿科技有限公司
• 主分類號: C12P21/04
• 分類號: C12P21/04;C12R1/645
• 代理公司: 安化縣梅山專利事務(wù)所 43005
• 代理人: 夏贊希

1.一種制備紐莫康定B0的發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、將菌種Glarea lozoyensis接種于裝有第一培養(yǎng)基的搖瓶中，培養(yǎng)得到菌源液；

步驟二、將所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵得到發(fā)酵液，所述菌源液與所述第二培養(yǎng)基的體積比為3～5:100，向所述第二培養(yǎng)基中泵送無菌空氣，控制所述第二培養(yǎng)基中的溶氧量不低于45％，pH值為5.0～5.4，通氣量為0.5～1.0VVM，罐壓為0.04～0.06Mpa；

步驟三、待所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵至24h后，向所述發(fā)酵液中泵送氨氣，并控制pH值為5.0～5.4；

步驟四、待所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵至60h后，通過插入所述第二培養(yǎng)基中的微生物培養(yǎng)板向所述發(fā)酵液中流加甘露醇，使所述發(fā)酵液總糖質(zhì)量濃度控制在1～3％之間，所述微生物培養(yǎng)板安裝有用于防止菌體在所述微生物培養(yǎng)板表面堆積的電極；

步驟五、待所述步驟一中制備的菌源液接種于裝有第二培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中發(fā)酵至13～15d后，收集所述發(fā)酵液中的紐莫康定B0；

其中，所述發(fā)酵罐包括罐體和插入所述罐體中的多個(gè)微生物培養(yǎng)板，所述微生物培養(yǎng)板包括骨架、第一膜層和第二膜層，所述第一膜層和所述第二膜層的邊沿分別與所述骨架相密封并圍成用于收容所述步驟四中的甘露醇的收容空間，所述電極往復(fù)彎折延伸的布設(shè)于所述收容空間內(nèi)，所述第一膜層和所述第二膜層上分別設(shè)有適宜所述甘露醇從所述收容空間向發(fā)酵液滲透的微孔，所述微孔的孔徑小于所述Glarea lozoyensis的菌體尺寸；所述發(fā)酵罐還包括沿所述罐體的內(nèi)壁螺旋設(shè)置的攪拌片、設(shè)于所述微生物培養(yǎng)板底部的曝氣管和設(shè)于所述罐體外側(cè)的氣泵，所述曝氣管上開設(shè)有連通所述曝氣管和所述外部空間的通孔，所述氣泵用于通過所述曝氣管向所述發(fā)酵罐中的第二培養(yǎng)基中泵送無菌空氣，所述攪拌片能與所述罐體發(fā)生相對旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。

2.如權(quán)利要求1所述的制備紐莫康定B0的發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟一具體包括：

將菌種Glarealozoyensis接種于裝有40～50ml第一培養(yǎng)基的250ml的搖瓶中，以180rpm～260rmp在搖床上培養(yǎng)2～3天后得到菌源液。

3.如權(quán)利要求1所述的制備紐莫康定B0的發(fā)酵方法，其特征在于，所述第一培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量百分比的組分：甘露醇25～35％、棉籽粉餅13～18％、葡萄糖8～12％、KH₂PO₄0.1～0.25％，余量為水，pH值為5.5～6.0。

4.如權(quán)利要求1所述的制備紐莫康定B0的發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟二中的第二培養(yǎng)基包括以下質(zhì)量百分比的組分：甘露醇8～12％、葡萄糖2～4％、蛋白胨2～4％、脯氨酸0.5～1.5％、無機(jī)鹽0.1～0.25％，余量為水，pH值為5.0～5.4。

5.如權(quán)利要求4所述的制備紐莫康定B0的發(fā)酵方法，其特征在于，所述無機(jī)鹽為K₂HPO₄、MnSO₄·4H₂O、NaCl、Fe(NH₄)₂(SO4)₂·6H₂O、NaNO₃、KNO₃、MgSO₄·7H₂O、FeSO₄·7H₂O、KH₂PO₄中的任意一種或多種。

6.如權(quán)利要求1所述的制備紐莫康定B0的發(fā)酵方法，其特征在于，所述骨架的相對兩側(cè)開設(shè)有連通所述收容空間的進(jìn)口和出口。