[發(fā)明專利]一種與大口黑鱸快速生長相關的單倍型標記及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810069432.6
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108250285B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發(fā)明（設計）人: 李勝杰;白俊杰;趙犖;樊佳佳;姜鵬;孫建國;吳建開
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/12;C12N15/11;C12Q1/6888
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝;舒勝英

1.一種大口黑鱸HSP70蛋白，其特征在于，所述大口黑鱸HSP70蛋白的氨基酸序列如SEQID NO：1所示。

2.編碼權利要求1所述大口黑鱸HSP70蛋白的基因，其特征在于，所述基因的cDNA序列如SEQ ID NO：2所示，其中第993位R為堿基G或A。

3.SNP位點或插入缺失突變位點在判斷大口黑鱸生長快慢中的應用；所述SNP位點位于HSP70基因組序列SEQ ID NO：3所示的第1313位和第2346位，所述插入缺失突變位點位于HSP70基因組序列SEQ ID NO：3所示的第259位和第2302位。

4.SNP位點或插入缺失突變位點在篩選快速生長大口黑鱸中的應用；所述SNP位點位于HSP70基因組序列SEQ ID NO：3所示的第1313位和第2346位，所述插入缺失突變位點位于HSP70基因組序列SEQ ID NO：3所示的第259位和第2302位。

5.一種檢測大口黑鱸HSP70基因型的方法，其特征在于：

檢測大口黑鱸HSP70基因組序列SEQ ID NO：3的第1313位堿基處的SNP位點是否為GA基因型；

或者/和，檢測HSP70基因組序列SEQ ID NO：3的第259位是否為T-基因型，其中“-” 表示堿基缺失；

或者/和，檢測HSP70基因組序列SEQ ID NO：3的第2302位是否為Y-基因型，其中Y表示堿基片段CTGTCTTCTGTTCATAAGTGTC，“-”表示堿基片段缺失；

或者/和，檢測HSP70基因組序列SEQ ID NO：3的第2346位堿基處的SNP位點是否為AT基因型。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）提取大口黑鱸DNA；

2）以提取得到的DNA為模板，PCR檢測大口黑鱸HSP70基因組序列SEQ ID NO：3的第1313位、第259位、第2302位或/和第2346位的基因型是否分別為GA、T-、Y-、AT基因型其中“-”表示堿基缺失，Y表示堿基片段CTGTCTTCTGTTCATAAGTGTC。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟2）中，當檢測大口黑鱸HSP70基因組序列SEQ ID NO：3的第1313位堿基處的SNP位點是否為GA基因型時，所用到的PCR檢測具體操作為：

用引物P1和P2對大口黑鱸DNA進行初次PCR擴增，得到初次PCR產物，

P1：5'- CGTCGACTTCTACACCTCCA -3'（SEQ ID NO：4）；

P2：5'- TCGTCTGGGTTGATGCTCTT -3'（SEQ ID NO：5）；

再將初次PCR產物用引物P3進行延伸擴增，將所得產物經測序分析，確定大口黑鱸HSP70基因序列第1313位堿基處的SNP位點是否為GA基因型；

P3：5'- CCAGGACGACGTCGTGGATCTG -3'（SEQ ID NO：6）。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述初次PCR擴增的反應體系為：

DNA 1μl

10×buffer 1.5μl

25mmol 的MgCl₂ 1.5μl

dNTP 0.3μl

P1引物 0.15μl

P2引物 0.15μl

Taq酶 0.3μl

H₂O 補至15μl；

初次PCR擴增反應程序為：94℃預變性3min；94℃變性15s，54℃退火15s，60℃延伸30s，24個循環(huán)；72℃延伸3min。