[發明專利]一種利用巨大芽孢桿菌制備亞油酸的方法

有效

• 申請號: 201810067168.2
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108004277B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 李祝;吉玉玉;楊龍;肖洋;張素
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12N1/20;C12R1/11
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

本發明公開了一種利用巨大芽孢桿菌制備亞油酸的方法，包括將巨大芽孢桿菌L2（Bacillus megaterium L2）菌株接種于NA固體斜面培養基上，30±1℃培養2天，活化3次，再接入NB液體種子培養基中，30±1℃，130?150 r/min，振蕩培養20?24h，得種子液，以6%（v/v）的比例將種子液轉接到250mL NB發酵培養基中，30±1°C，130?150 r/min，培養3天終止發酵。發酵液在5000?6000 r/min、4°C下離心15?20min，進行菌液分離，除去發酵液，收集菌體細胞，即得。本發明產多不飽和脂肪酸亞油酸的條件穩定，培養基質容易獲得，發酵條件穩定、工藝簡單。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體來說涉及一種巨大芽孢桿菌利用牛肉膏生產亞油酸的方法。

背景技術

巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）屬于芽孢桿菌屬，是一種很有潛力的功能型細菌，具有營養要求低、培養條件簡便、繁殖迅速、安全無毒等優點，廣泛應用于生物防治、凈化水質、農藥降解、微生物菌肥、抗生素合成、酶工業等領域。細菌中含有多種多不飽和脂肪酸，主要包括亞油酸(LA)、共軛亞油酸(CLA)、γ-2亞麻酸(GLA)、花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等，是生物膜的重要組成成分，是生物活性物質的前體，對人體的健康具有重要意義。

亞油酸（Linoleic acid）是一種人體不能自己產生，必須通過飲食獲得的必需脂肪酸，作為一種多不飽和脂肪酸（PUFA），它是比肉食或乳制品飽和脂肪更健康的飲食成分，能有效降低血脂、軟化血管、降低血壓、促進微循環，可預防或減少心血管病的發病率；共軛亞油酸作為亞油酸的異構體，具有抗癌、抗動脈硬化，殺死或抑制癌細胞產生的功效，還能促進脂類代謝，參與能量分配并促進生長，在動物飼養方面具有廣闊的用途。目前，制備亞油酸大多以富含亞油酸的油脂為原料，經水解后得到混合脂肪酸，混合脂肪酸經分離、純化后得到亞油酸。在工業上制備混合脂肪酸的方法較多，歸納起來有三類：一是合成法即石蠟氧化法或一烴氧化法，二是從造紙廢液中回收妥爾油脂肪酸，三是從天然油脂無催化水解或經酶水解來制取，其生產工藝復雜、成本高、能耗大、穩定性差。微生物中多不飽和脂肪酸含量豐富，細菌多不飽和脂肪酸主要以磷脂或其他脂類形式存在于膜上，并且微生物生長不受季節、地域和氣候的影響，發酵周期短，具有適應性強、生長繁殖迅速、易培養、不受原料產地限制等特點。因此，利用微生物生產多不飽和脂肪酸亞油酸是一條重要途徑，細菌產PUFA可以作為生物餌料，將其引入海洋水產養殖食物鏈，將對提高水產品PUFA品質有重要意義。且細菌的遺傳機制相對簡單，研究生產多不飽和脂肪酸的方法將有利于闡明其PUFA的合成機制，有助于提高細菌生產PUFA的能力，在向其他生物進行轉基因研究領域也具有良好的前景。

發明內容

本發明的目的在于克服上述缺點而提供的一種產多不飽和脂肪酸亞油酸的條件穩定，培養基質容易獲得，發酵條件穩定、工藝簡單的利用巨大芽孢桿菌制備亞油酸的方法。

一種利用巨大芽孢桿菌制備亞油酸的方法，包括：

（1）菌種活化

將巨大芽孢桿菌L2（Bacillus megaterium L2）菌株接于NA固體斜面培養基上，30±1℃靜置培養1-2天，活化3次，保存于4℃冰箱備用；

（2）種子液的制備

將活化的巨大芽孢桿菌L2菌株利用接種環刮取兩環接種于250mL NB液體種子培養基中，30±1℃，130-150r/min，搖瓶培養20-24h，得種子液；

（3）發酵培養