[發明專利]貓杯狀病毒熒光免疫層析檢測試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 201810067151.7
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108362877A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 吳培星;韓濤;宋楠;付軍權;李純玲;張繼瑜
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所;北京天之泰生物科技有限公司;北京天恩泰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/533
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

本發明“貓杯狀病毒熒光免疫層析檢測試紙條及其制備方法”，涉及動物病毒檢測技術，其特征在于：包括背襯以及在背襯上依次設置的結合墊、層析膜以及吸水墊，構成可使液體樣品從結合墊層析到吸水墊的層析路徑；所述結合墊上結合有熒光微球標記抗體復合物；所述層析膜上設置有與所述層析路徑垂直的檢測線和對照線。可用于現場快速檢測,步驟簡單快捷，且靈敏度和特異性都與PCR方法相當，可用于貓杯狀病毒的檢測和預防。

技術領域

本發明屬于動物病毒檢測技術領域,具體涉及貓杯狀病毒(Feline calicivirus,FCV)熒光免疫層析檢測試紙條及其制備方法。

背景技術

貓杯狀病毒(Feline calicivirus,FCV),為杯狀病毒科,水瘡性病毒屬,是一種單鏈RNA病毒。FCV是貓病毒性呼吸道傳染病主要表現為口腔潰瘍、眼鼻分泌物增多、流涎、結膜炎、羞明、口腔炎、氣管炎、支氣管炎,伴有雙相熱。是貓的多發病,發病率高,強毒株感染可發生肺炎、呼吸困難、甚至死亡。主要傳染源為病貓和帶毒貓,病貓在急性期可隨分泌物和排泄物排出大量病毒,直接傳染易感貓。帶毒貓經治療,癥狀可消失,但臨床康復后仍長期排毒,是危險的傳染源。

目前,檢測FCV的方法包括：電鏡觀察技術、免疫熒光試驗、病毒核酸的PCR檢測等試驗，然而這些方法費時費力，所以難以推廣雖然特異性和敏感性都很高,但需要專門的儀器設備和技術人員,只能用于實驗室檢測。這些方法均不適用于現場檢測、快速檢測和基層獸醫部門臨床檢測。現有的針對動物病毒檢測方法包括熒光免疫層析檢測的方法,熒光免疫層析技術,是免疫熒光技術工和傳統免疫層析技術相結合發展創新的一種定量新型檢測技術。免疫層析技術以固定有檢測線和控制線的條狀纖維層析材料為固定相,測試液為流動相,通過毛細作用使待測物在層析條上移動,待測物在線處發生特異性免疫反應。游離物在線處發生免疫反應。該技術在保留膠體金免疫層析技術操作簡便、檢測快速、便攜性強的優點外,還通過熒光示蹤增強技術實現了檢測結果的精確定量。

針對貓杯狀病毒(Feline calicivirus,FCV)建立熒光免疫層析檢測試紙和檢測技術,用于現場快速檢測,有利于對感染流行病學的調查,從而為即的預防和控制提供科學的依據,有利于動物的健康發展,成為本領域技術人員函待解決的技術難題。目前還未見到報道。

發明內容

基于上述領域的技術需求和空白，本發明建立了針對貓杯狀病毒(Felinecalicivirus,FCV)的熒光免疫層析檢測試紙條及其制備方法,可以用于FCV的快速檢測和現場檢測：

為了達到上述技術效果,本發明的技術方案包括

一種貓杯狀病毒(Feline calicivirus,FCV)熒光免疫層析檢測試紙條，其特征在于：

包括背襯以及在背襯上依次設置的結合墊、層析膜以及吸水墊，構成可使樣品從結合墊層析到吸水墊的層析路徑；

所述結合墊上結合有熒光微球標記抗體復合物；所述層析膜上設置有與所述層析路徑垂直的檢測線和對照線；

所述熒光微球標記抗體復合物是熒光微球與兔抗貓杯狀病毒(Felinecalicivirus,FCV)F蛋白多克隆抗體的偶聯物；

所述檢測線由羊抗貓杯狀病毒(Feline calicivirus,FCV)多克隆抗體包被而成,所述對照線由葡萄球菌蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)包被而成；

所述熒光微球粒徑為180-240nm。

在一些實施例中，所述結合墊上，其特征在于，所述結合墊上，所述熒光微球標記抗體復合物的包被密度：以兔抗貓杯狀病毒(Feline calicivirus,FCV)F蛋白多克隆抗體質量計為7.5ug/每平方厘米。