[發(fā)明專利]一種快速檢測抗性雜草的Ile-2041-Asn突變的分子檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810066606.3
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108048534A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周鳳艷;張勇;沈艷;王梅;高同春
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省農(nóng)業(yè)科學院植物保護與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6895
• 代理公司: 合肥國和專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34131
• 代理人: 孫永剛

1.一種快速檢測抗性雜草的Ile-2041-Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，基于LAMP技術(shù)對該突變進行快速鑒定，包括以下步驟：

(1)分別提取待測樣品的基因組DNA；

(2)運用特異性引物進行LAMP恒溫擴增；

(3)LAMP擴增產(chǎn)物中加入熒光染料，觀察其顏色變化，和/或，在瓊脂糖凝膠電泳上分離，觀察擴增效果；

(4)鑒定是否為具有Ile-2041-Asn突變的棒頭草種群。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抗性雜草的Ile-2041-Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中的特異性引物為兩對，分別為

F3:5’-cctctgttcatccttgctaactgg-3’，B3:5’-gctctgcagccttggggatat-3’

和FIP:5’-gcaattatccttcaaaaggcttctctggtgggcaaag-3’，

BIP:5’-gagaacctgaggacgtaccaaaggcaggctgatt-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抗性雜草的Ile-2041-Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中的特異性引物的設(shè)計方法為：在含有Ile-2041-Asn突變的抗炔草酯的棒頭草基因的ACCase基因的CT區(qū)上設(shè)計1對外引物和1對內(nèi)引物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抗性雜草的Ile‐2041‐Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中恒溫擴增時的反應(yīng)體系為：

。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抗性雜草的Ile‐2041‐Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中恒溫擴增時的反應(yīng)參數(shù)為：56℃-60℃，60min，80℃ 10min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抗性雜草的Ile‐2041‐Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中恒溫擴增時的反應(yīng)參數(shù)為：58℃ 60min，80℃ 10min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抗性雜草的Ile-2041-Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，步驟(3)中的熒光染料為SYBR GreenⅠ。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抗性雜草的Ile-2041-Asn突變的分子檢測方法，其特征在于，所述步驟(5)鑒定時，若LAMP擴增產(chǎn)物顯示綠色，和/或，電泳圖譜為梯狀條帶，判定為帶有Ile-2041-Asn突變的棒頭草種群；若LAMP擴增產(chǎn)物為橙色，和/或，電泳圖譜無條帶擴增，判定為不帶有Ile-2041-Asn突變的棒頭草種群。

9.一種用于快速檢測抗性雜草的Ile-2041-Asn突變的試劑盒，其包含以下反應(yīng)體系：

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