[發明專利]用于鑒別沙門氏菌和單增李斯特菌的檢測分析方法

在審

• 申請號: 201810066077.7
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108034692A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 姜川
• 申請（專利權）人: 麗水市食品藥品與質量技術檢驗檢測院
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12Q1/04;C12R1/42;C12R1/01
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.用于鑒別沙門氏菌和單增李斯特菌的檢測分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)樣品的制備：

選擇對數期的沙門氏菌全細胞制備懸液，以轉速3 000r.min-1離心分離濕菌體，以無菌水分三次洗滌沉淀部分，充分振蕩搖勻使菌體分散開來，平板菌落計數法進行菌落計數，另用移液槍移取1mL菌液于大試管中，加入9mL無菌水，充分振蕩搖勻形成10倍稀釋菌懸液，然后逐級進行19次10倍稀釋，制成一組20個濃度梯度的沙門氏菌全細胞懸液，濃度梯度值呈比差為10的等差序列，備用；一組20個濃度梯度的單增李斯特氏菌全細胞懸液的制備同沙門氏菌全細胞懸液制備過程；

用超聲波細胞粉碎儀破碎沙門氏菌的全細胞，以轉速15 000r.min-1離心分離，沉淀部分為細胞壁、上清液為細胞質，將細胞質懸液充分振蕩搖勻，用移液槍移取1mL菌液于大試管中，加入9mL無菌水，充分振蕩搖勻形成10倍稀釋菌懸液，然后逐級進行19次10倍稀釋過程，制成一組濃度梯度的沙門氏菌細胞質懸液，20個濃度梯度值呈比差為10的等差序列，備用；一組20個濃度梯度的單增李斯特氏菌細胞質懸液的制備同沙門氏菌細胞質懸液制備過程；

一組20個濃度梯度的沙門氏菌細胞壁懸液的制備同沙門氏菌細胞質懸液制備過程；一組20個濃度梯度的單增李斯特氏菌細胞壁懸液的制備同單增李斯特氏菌細胞質懸液制備過程；

(2)樣品的測定：

采用近紅外光譜儀對沙門氏菌、單增李斯特菌的各組分進行近紅外光譜透射掃描；

(3)數據處理：

將處理后的光譜數據利用主成分分析法PCA法進行數據的處理，選取前兩個主成分的得分值，并采用分析軟件OPUS 6.5中主成分分析法對光譜數據進行分析。

2.根據權利要求1所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟(1)中，沙門氏菌的平板菌落計數法進行菌落計數結果為80億.mL-1；單增李斯特氏菌的平板菌落計數法進行菌落計數結果為175億.mL-1。

3.根據權利要求1所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟(1)中，沙門氏菌的全細胞的超聲波破碎參數選為400W、破碎5s、間隔5s、實際破碎總時間50min。

4.根據權利要求1所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟(1)中，單增李斯特氏菌的全細胞的超聲波破碎參數為500W、破碎4s、間隔5s、實際破碎總時間50min。

5.根據權利要求1所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟(2)中，采用完全相同的儀器參數對沙門氏菌、單增李斯特菌的各組分進行近紅外光譜透射掃描，其中，將近紅外光譜儀的分辨率設定為為4cm-1，掃描次數為64次，掃描范圍4 000～12 000cm-1，環境溫度控制在20℃，空氣濕度為70％，數據格式為Log(1/R)，每個樣品重復掃描3次，其平均值作為該樣品的光譜數據，每張光譜包含2 075個波長點的吸光度。

6.根據權利要求1～5任一項所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟(3)中，通過PCA分析，所述沙門氏菌全細胞的第一組分得分范圍為-0.05～0.03，第二組分得分范圍為-0.13～-0.02；所述單增李斯特菌的全細胞的第一組分得分范圍為-0.09～0.04，第二組分得分范圍為0.01～0.25。

7.根據權利要求1～5任一項所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟(3)中，通過PCA分析，所述沙門氏菌的細胞壁的第一組分得分范圍為-0.10～0.05，第二組分得分范圍為-0.02～0.15；所述單增李斯特菌的細胞壁的第一組分得分范圍為0.05～0.28，第二組分得分范圍為-0.30～-0.02。

8.根據權利要求1～5任一項所述的檢測分析方法，其特征在于：步驟(3)中，通過PCA分析，所述沙門氏菌的細胞質的第一組分得分范圍為0.04～0.12，第二組分得分范圍為-0.22～-0.10；所述單增李斯特菌的細胞質的第一組分得分范圍為0.02～0.06，第二組分得分范圍為-0.03～0.12。