[發明專利]一種冷凍保存人胎盤羊膜和絨毛膜的保護液及其制備方法和使用方法在審
| 申請號： | 201810065992.4 | 申請日： | 2018-01-24 |
| 公開（公告）號： | CN108077243A | 公開（公告）日： | 2018-05-29 |
| 發明（設計）人： | 曹毓琳;劉俊江;時兆田;白志惠 | 申請（專利權）人： | 北京臻溪谷醫學研究中心（有限合伙） |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 王玉松 |
| 地址： | 100032 北京市西城*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 保護液 冷凍保存 人胎盤 絨毛膜 羊膜 制備 氨基酸混合物 葡萄糖 二甲基亞砜 谷胱甘肽 去離子水 胎牛血清 甘油 異丙醇 血清 輔酶 細胞 保存 | ||
1.一種冷凍保存人胎盤羊膜和絨毛膜的保護液，其特征在于，每100ml保護液主要由以下各成分組成：
甘油1-10g、異丙醇5-15g、葡萄糖5-15g、二甲基亞砜1-10g、谷胱甘肽0.2-2g、輔酶Q100.5-2g、氨基酸混合物1-5g、ATP 0.1-1g，余量為去離子水。
2.如權利要求1所述的保護液，其特征在于，所述氨基酸混合物包括精氨酸、賴氨酸、組氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺。
3.如權利要求2所述的保護液，其特征在于，所述氨基酸混合物的精氨酸、賴氨酸、組氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺的重量比例為2:1:2:2:3。
4.如權利要求1所述的保護液，其特征在于，每100ml保護液主要由以下各成分組成：
甘油5g、異丙醇10g、葡萄糖10g、二甲基亞砜5g、谷胱甘肽1g、輔酶Q10 1g、氨基酸混合物3g、ATP 0.5g，余量為去離子水。
5.如權利要求1-4任一所述的保護液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S11，取一半目標體積的去離子水，加入葡萄糖，溶解后，加入甘油和異丙醇，攪拌均勻，121℃濕熱滅菌，得到基質A；
S12，谷胱甘肽、輔酶Q10、氨基酸混合物和ATP用十分之一目標體積的去離子水溶解，攪拌均勻，過濾滅菌，得到基質B；
S13，無菌條件下，基質B與基質A混合，用無菌的去離子水定容至目標體積，得到保護液。
6.如權利要求1-4任一所述的保護液的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：
S21，母體無HIV、HBV的自然生產或剖腹產的人胎盤，用有齒鑷輕輕的分離開羊膜和絨毛膜，洗盡血液，剔除血管，并剪成1.0～2.0mm
S22，保護液預冷到-20℃；
S22，羊膜和絨毛膜轉移到冷凍管中，加入預冷的保護液至液面沒過羊膜和絨毛膜2-3cm，冷凍管的使用高度不超過1/2；
S23，10min后，冷凍管以5℃/min的速度快速冷凍至-100℃；
S24，轉移至液氮罐中超低溫保存。
7.如權利要求6所述的保護液的使用方法，其特征在于，還包括解凍步驟：
S241，從液氮罐中中取出冷凍管，加入預冷的保護液至冷凍管滿容量，倒置冷凍管；
S242，5-60min后，搖晃1-3min，冷凍管正過來，轉移至30℃恒溫水浴解凍；
S243，用無菌生理鹽水沖洗羊膜和絨毛膜3次。
8.如權利要求2所述的保護液的使用方法，其特征在于，S242中30min后，搖晃1-3min，轉移至30℃恒溫水浴解凍。
9.如權利要求1-4任一所述的保護液在制備冷凍保存人胎盤羊膜和絨毛膜的保護液中的應用。
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