[發明專利]一種檢測FLT3-D835基因的試劑盒與應用

有效

• 申請號: 201810065764.7
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108410981B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 於然;劉明坤;葉鋒
• 申請（專利權）人: 北京旌準醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種檢測FLT3-D835基因的試劑盒，其特征在于：包括：針對EcoRV內切核酸酶識別位點GATATC設計的正向引物、針對EcoRV內切核酸酶識別位點GATATC設計的反向引物、PCR反應液Mix、純水、EcoRV內切核酸酶及內切核酸酶緩沖液；

所述針對EcoRV內切核酸酶識別位點GATATC設計正向引物的核苷酸序列如SEQ.ID.No1：

5’-CAGGAAACAGCTATGACCAGGAACGTGCTTGTCACCC-3’

所述針對EcoRV內切核酸酶識別位點GATATC設計反向引物的核苷酸序列如SEQ.ID.No2：

5’-ACGACGGCCAGTGATATCATAGCAGCCTCACATTGCCC-3’；

經EcoRV內切核酸酶識別位點的正向引物SEQ.ID.No1和反向引物SEQ.ID.No2 PCR擴增后的D835擴增產物用于設計酶切反應體系進行酶切反應，酶切產物經處理過程預處理后用于電泳檢測；

所述酶切反應體系成分包括D835擴增產物、EcoRV內切核酸酶、內切核酸酶緩沖液以及純水，將以上4種成分按照一定比例進行配制，將酶切反應體系置于37℃±1℃進行充分的酶切反應；

所述酶切反應體系的總體積為0.015ml，其中，EcoRV內切核酸酶用量為0.0010ml，內切核酸酶緩沖液為0.0010ml，純水為0.008ml，D835擴增產物0.003ml；

所述處理過程的具體過程為：取出經SEQ.ID.No1和SEQ.ID.No2所示的引物序列擴增后的酶切產物，往反應體系中加入一定量的補充液，然后與上樣緩沖液進行1:3的比例混合，使總體系達到0.004ml，經混合物充分振蕩混勻，離心后得到預處理液。

2.如權利要求1所述的檢測FLT3-D835基因的試劑盒，其特征在于：擴增后的FLT3-D835產物序列均包含EcoRV內切核酸酶識別位點GATATC。

3.如權利要求1所述的檢測FLT3-D835基因的試劑盒，其特征在于：所述針對EcoRV內切核酸酶識別位點GATATC設計的正向引物的核苷酸序列SEQ.ID.No1，包括一段與人類基因組序列非同源的接頭序列；針對EcoRV內切核酸酶識別位點GATATC設計的反向引物的核苷酸序列SEQ.ID.No2，包括一段與人類基因組序列非同源的接頭序列和內標序列。