[發明專利]一種牛奶中A2-β-酪蛋白的分離方法

在審

• 申請號: 201810065481.2
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108191967A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 劉虎傳;郭建;譚蓮英;范光彩;錢成林;宋艷梅;夏忠悅;林永裕;何佳燕;朱菲;張海濤;李伯
• 申請（專利權）人: 新希望雙喜乳業（蘇州）有限公司;新希望乳業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/14
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本發明公開了一種牛奶中A2?β?酪蛋白的分離方法，綜合考慮了β?酪蛋白的等電點、Ca²⁺離子敏感、低溫低酸游離等特性，探索出A2?β?酪蛋白的提純方法，能夠快速分離富集得到純度在85％以上的A2?β?酪蛋白，該方法不僅能夠用于A2?β?酪蛋白的分離提純，也能夠用于A1?β?酪蛋白或者同時含有A1?β?酪蛋白和A2?β?酪蛋白的混合β?酪蛋白的分離提純，克服了現有技術中β?酪蛋白分離時間長、步驟繁瑣以及耗費高昂的問題，為檢測乳制品中β?酪蛋白種類提供了條件，而且工藝簡單、成本低，適于大規模生產。

技術領域

本發明涉及分離提純領域，具體涉及一種牛奶中A2-β-酪蛋白的分離方法。

背景技術

酪蛋白是牛乳中含量最高的蛋白質，占牛乳蛋白含量的80％左右。根據氨基酸組成和電泳行為的不同，酪蛋白可分為αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，其中β-酪蛋白約占牛乳酪蛋白總量的30-35％。β-酪蛋白又存在多種變體，最常見的是A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白，兩者的區別在于氨基酸鏈的第67位存在變異，前者為組氨酸，后者為脯氨酸。研究發現，A1-β-酪蛋白在生物體內會水解產生β-酪啡肽(BCM-7)，該活性肽能夠導致缺血性心臟病、動脈粥樣硬化、I型糖尿病、新生兒猝死癥及一些精神方面的疾病，因此含有A2-β-酪蛋白的乳制品更加健康安全，在國內外市場上也更受歡迎。

由于奶牛的基因決定了所產牛乳中β-酪蛋白是A1型或者A2型，所以目前主要通過牛只基因鑒定法來判斷牛乳中β-酪蛋白的種類，該法不能判斷未知奶?；蛐偷呐Ｈ闃悠?。為了定性定量檢測未知牛奶中β-酪蛋白的類型及其含量，首要的獲得A2-β-酪蛋白，然而由于工藝或者成本等因素，市場上并沒有售賣A2-β-酪蛋白的標準化商品，需要從A2型牛奶中分離制備。然而現有的分離純化酪蛋白的方法不僅步驟繁瑣、耗時長、花費高昂，而且對β-酪蛋白的分離純化效果差。因此，迫切需要一種對牛奶中β-酪蛋白，尤其是A2-β-酪蛋白的高效便捷、廉價易行提純分離方法。

發明內容

針對現有技術中存在的不足之處，本發明的目的就是提供簡單、便宜的牛乳β-酪蛋白的分離方法。

本發明提供了一種A2-β-酪蛋白的分離方法，包括下述步驟：

1)將脫脂的A2型牛奶在25-35℃下堿調pH值到10.5-11.5；

2)在攪拌條件下向脫脂奶中加入鈣鹽，使脫脂奶體系中鈣離子濃度在0.05-0.08mol/L，酸調體系pH值至中性，離心，保留沉淀；

3)用純凈水洗滌沉淀1-2次，向沉淀中加入pH值為10.5-11.5的堿溶液，并在2-4℃下冷凍攪拌2h，得到蛋白溶液；

4)酸調蛋白溶液pH值到4-5，在2-4℃下冷凍離心，收集上清液并轉移至另一燒杯中，在25-35℃下保持25-35min，離心，保留沉淀；

5)洗滌沉淀，干燥后得到目標蛋白，并在-20℃冷凍保存目標蛋白。

優選的是，步驟1)中所述脫脂的A2型牛奶的制備方法：將A2型牛奶在2℃下冷凍離心，留取下層的脫脂奶。

優選的是，步驟1)中所述堿為1mol/L氫氧化鈉溶液，堿調溫度為30℃，堿調pH值到11。

優選的是，步驟2)中所述鈣鹽為0.5mol/L氯化鈣溶液，脫脂奶體系中鈣離子濃度為0.065mol/L；所述酸為1mol/L鹽酸；所述離心時間10min，轉速4000r/min。

優選的是，步驟3)中所述洗滌為向沉淀中加入純凈水并攪拌至呈乳濁液，將該乳濁液在4000r/min下離心10min，保留沉淀，即為固體蛋白。

優選的是，步驟3)中所述堿溶液的pH值為11，冷凍攪拌溫度為2℃。