[發明專利]一種牛奶中A2-β-酪蛋白的檢測方法

有效

• 申請號: 201810065470.4
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108414628B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 范光彩;劉虎傳;郭建;譚蓮英;錢成林;宋艷梅;夏忠悅;林永裕;何佳燕;朱菲;史寒琴
• 申請（專利權）人: 新希望雙喜乳業（蘇州）有限公司;新希望乳業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本發明公開了一種牛乳中A2?β?酪蛋白的檢測方法，首先分別檢測了已經通過基因型鑒定為A1型和A2型的牛奶的高效液相色譜圖，并與αs?酪蛋白、β?酪蛋白和κ?酪蛋白標準品的高效液相色譜圖進行比對，確定出了A1?β?酪蛋白和A2?β?酪蛋白的色譜峰型及出峰時間，進而能夠定性檢測出未知牛奶中β?酪蛋白是否為A2?β?酪蛋白；然后成功地從A2型牛奶中分離出了A2?β?酪蛋白，并測得A2?β?酪蛋白在高效液相中峰面積與濃度的對應關系，進而能夠定量檢測出未知牛奶中A2?β?酪蛋白的含量；本發明所涉及的檢測方法簡單、便捷，適宜于大規模推廣應用。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及一種牛奶中A2-β-酪蛋白的檢測方法。

背景技術

酪蛋白是牛乳中含量最高的蛋白質，占牛乳蛋白含量的80％左右。根據氨基酸組成和電泳行為的不同，酪蛋白可分為αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，其中β-酪蛋白約占牛乳酪蛋白總量的30-35％。β-酪蛋白又存在多種變體，最常見的是A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白，兩者的區別在于氨基酸鏈的第67位存在變異，前者為組氨酸，后者為脯氨酸。研究發現，A1-β-酪蛋白在生物體內會水解產生β-酪啡肽(BCM-7)，該活性肽能夠導致缺血性心臟病、動脈粥樣硬化、I型糖尿病、新生兒猝死癥及一些精神方面的疾病，因此含有A2-β-酪蛋白的乳制品更加健康安全，在國內外市場上也更受歡迎。

由于奶牛的基因決定了所產牛乳中β-酪蛋白是A1型或者A2型，所以目前主要通過牛只基因鑒定法來判斷牛乳中β-酪蛋白的種類，該法不能判斷未知奶牛基因型的牛乳樣品，尤其是市售牛乳產品中β-酪蛋白的種類。現有的酪蛋白分析檢測方法，利用高效液相色譜儀、凝膠電泳儀或者毛細管電泳儀等，僅能檢測出αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，無法判斷出β-酪蛋白的A1或A2型，而且在前處理中分離純化酪蛋白的步驟繁瑣、耗時長、花費高昂。因此，迫切需要一種對未知奶樣中β-酪蛋白的高效、便捷提純分離方法，以及利用常規檢測儀器就能準確、快速檢定出其中β-酪蛋白種類的方法。

發明內容

針對現有技術中存在的不足之處，本發明的目的就是提供便捷廉價的A2-β-酪蛋白的檢測檢定方法。

本發明提供了一種牛奶中A2-β-酪蛋白的檢測方法，包括：

對A1型牛奶和A2型牛奶進行高效液相測試，其中A1型牛奶和A2型牛奶是經過多次常規基因檢測法所確定，眾所周知，A1型牛奶中的β-酪蛋白只有A1-β-酪蛋白，A2型牛奶中的β-酪蛋白只有A2-β-酪蛋白，這是由奶牛的基因型所決定，將所得高效液相色譜圖分別與αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白標準品的高效液相譜圖做對比，識別A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白的特征峰和出峰時間，其中β-酪蛋白標準品并不能確定為A1型或者A2型，目前也沒有市售的A2-β-酪蛋白；結合待測牛奶的高效液相譜圖定性檢測其中β-酪蛋白的類型，即通過其中β-酪蛋白的峰形、出峰時間等判斷其為A1-β-酪蛋白或者A2-β-酪蛋白或者兩者的混合物。

優選的是，所述檢測方法還包括：

分離出A2型牛奶中的A2-β-酪蛋白并進行高效液相檢測，獲得A2-β-酪蛋白在高效液相中峰面積與濃度的對應關系，結合待測牛奶的高效液相譜圖定量檢測其中A2-β-酪蛋白的含量。

優選的是，所述A1型牛奶、A2型牛奶、αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、A2-β-酪蛋白以及待測牛奶在相同的條件下進行高效液相色譜測試，色譜條件如下：

色譜柱Vydac Everest C18 Column，250×4.6mm，5μm,

進樣量50μL；

柱溫40℃；

檢測波長241nm，輔助280nm；

洗脫時間65min，流速1mL/min；