[發明專利]一種牛奶中A2-β-酪蛋白的檢測方法

有效

• 申請號: 201810065470.4
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108414628B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 范光彩;劉虎傳;郭建;譚蓮英;錢成林;宋艷梅;夏忠悅;林永裕;何佳燕;朱菲;史寒琴
• 申請（專利權）人: 新希望雙喜乳業（蘇州）有限公司;新希望乳業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

1.一種牛奶中A2-β-酪蛋白的檢測方法，其特征在于，包括：

對A1型牛奶和A2型牛奶進行高效液相測試，將所得高效液相色譜圖分別與αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白標準品的高效液相譜圖做對比，識別A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白的特征峰和出峰時間；結合待測牛奶的高效液相譜圖定性檢測其中β-酪蛋白的類型；

分離出A2型牛奶中的A2-β-酪蛋白并進行高效液相檢測，獲得A2-β-酪蛋白在高效液相中峰面積與濃度的對應關系，結合待測牛奶的高效液相譜圖定量檢測其中A2-β-酪蛋白的含量；

所述分離出A2型牛奶中的A2-β-酪蛋白的步驟如下：

1)將A2型牛奶脫脂，邊攪拌邊用鹽酸調節pH值到4-5，并將該脫脂奶置于50℃水浴鍋中保溫10min，然后常溫離心分層，保留沉淀；用pH值為4-5的酸溶液沖洗離心管兩次，棄去上清液，保留沉淀；

2)向沉淀中加入pH值為4-5的酸溶液，并不斷攪拌至呈乳濁液；將該乳濁液降溫至2-4℃并繼續攪拌12-16h，離心分層，留取上清液；

3)將上清液用200目濾布過濾，收集濾液；將該濾液水浴升溫至30℃，渦旋混勻后冷凍干燥，即得到目標蛋白，在-20℃冷凍保存目標蛋白；

其中，所述A1型牛奶、A2型牛奶、αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、A2-β-酪蛋白以及待測牛奶在相同的條件下進行高效液相色譜測試，色譜條件如下：

色譜柱Vydac Everest C18 Column，250×4.6mm，5μm,

進樣量50μL；

柱溫40℃；

檢測波長241nm，輔助280nm；

洗脫時間65min，流速1mL/min；

流動相包括流動相A和流動相B，其中，流動相A是質量分數為0.1％的三氟乙酸水溶液，流動相B是質量分數為0.1％的三氟乙酸乙腈溶液；洗脫程序：

時間/min	流動相A/％	流動相B/％	-1]]>
0	75.7	24.3	1
2	71.2	28.8	1
17	64.8	35.2	1
30	61.8	38.2	1
45	55.0	45.0	1
48	46.0	54.0	1
53	46.0	54.0	1
55	75.7	24.3	1
65	75.7	24.3	1

。