[發明專利]一種乳制品中A2-β-酪蛋白含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201810064391.1
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108181399B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 劉虎傳;譚蓮英;郭建;范光彩;錢成林;張海濤;宋艷梅;夏忠悅;林永裕;劉論;唐果;方瓊燕
• 申請（專利權）人: 新希望乳業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 四川力久律師事務所 51221
• 代理人: 陳明龍

本發明公開了一種乳制品中A2?β?酪蛋白含量的檢測方法，包括準備樣品和標準品：如果是奶粉則加水配制成乳液，將乳液或牛乳離心脫脂；加入緩沖液，渦旋混勻，靜置10?120min，離心5?20min；取下清液，加入緩沖液定容，渦旋混勻，用0.45μm PTFE濾膜過濾過濾，待上機檢測；HPLC檢測分析，采用梯度洗脫程序進行洗脫，流動相A：0.1%三氟乙酸、流動相B：0.1%乙腈。本發明檢測分析方法可以實現對于普通牛奶中A1?β?酪蛋白和A2?β?酪蛋白亞型狀態檢測分析研究，通過預處理以及色譜條件的協同調整，實現對于兩種亞型的充分分離，進而結合標準品進行快速判斷牛乳原料是否屬于純品A2?β?酪蛋白亞型牛乳替代現有基因檢測分析方法，簡化檢測分析研究的難度，降低檢測分析成本。

技術領域

本發明涉及一種酪蛋白含量檢測方法，特別涉及一種乳制品中A2-β-酪蛋白含量的檢測方法，特別是牛乳中酪蛋白檢測分析，屬于乳制品領域。

背景技術

牛奶中含有豐富的營養成分，每一杯250mL的牛奶中固含量為30-38克，包括10-20克乳糖、5-7克脂肪、2-2.5克礦物質以及7-10克蛋白質。因此，牛奶被廣泛的推薦作為青少年健康飲品，補充青少年生長發育階段對于各種營養成分的需求。

牛奶蛋白含量豐富，同時其中蛋白質又被分為酪蛋白和乳清蛋白，乳清蛋白是指溶解分散在乳清中的蛋白，酪蛋白則主要是含磷鈣的結合蛋白。因此，酪蛋白既可以為人體提供氨基酸來源，又可以作為磷、鈣元素的來源，對于幼兒生長發育具有重要意義。

在牛奶酪蛋白中30-35％是β-酪蛋白，β-酪蛋白有多種變體，最常見是A1和A2亞型。他們的區別是組成這種蛋白質的209個氨基酸中的一個氨基酸不同，氨基酸鏈的第67位是脯氨酸(proline)的酪蛋白是A2-β-酪蛋白，第67位是組氨酸(histidine)的則是A1-β-酪蛋白。兩種β-酪蛋白在結構上的細微差別意味著它們被吸收的情況也有所不同。A2-β-酪蛋白相比于A1-β-酪蛋白，在消化酶作用下產生β-酪啡肽-7更少，可以有效的減少BCM-7類鴉片活性肽對于腸道活性影響，更有利于人體吸收利用、健康。

隨著現代社會消費升級，對于更加健康安全的乳制品提出更高要求，A2牛奶近年來在中國市場取得非常好的市場效應。目前能夠參照的技術手段主要是牛只基因鑒定法，基因鑒定法主要針對牛只的基因鑒定，但是對于某一未知牛乳樣品基因型鑒定不適用。針對市售牛乳產品中β-酪蛋白的構型確認及具體含量如何，需要開發一種通用的檢測方法。

發明人在大量的研究工作總結以后，提出了通過HPLC色譜法快速檢測分析牛乳中酪蛋白類型的方法，但是市場上對于A1、A2亞型β-酪蛋白標準品的提供較少，難以滿足檢測分析的需求。

現有技術中也提供一些關于酪蛋白檢測分離的方法，但大多僅限于αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白三大類型的檢測和分離，并沒有關于β-酪蛋白A1和A2類型的拆分研究。

市場銷售或者一般途徑得到的牛乳樣品(或者干酪素)均為A1和A2的混合樣，采購的標準品β-酪蛋白也是兩種構型的混合物。缺少標準品的情況下，在技術檢測上不能明確色譜圖上兩個峰所代表的具體成分，無法進行定性及定量分析，也就無法確定不同的酪蛋白的類型，也就無法準確的檢測分析不同的酪蛋白含量。

現有資料上看，利用液相色譜檢測技術得到的色譜圖上，β-酪蛋白出現兩個色譜峰，但是在文獻資料中并未明確指出兩個峰所代表的β-酪蛋白基因構型。導致該現象的原因主要是，市場銷售或者一般途徑得到的牛乳樣品(或者干酪素)均為A1和A2的混合樣，采購的標準品β-酪蛋白也是兩種構型的混合物。所以，在技術檢測上不能明確色譜圖上兩個峰所代表的具體成分。

A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白標準物質的缺乏，無法在市場上購買到商品化的標準品物，進而導致A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白定量檢測無法實現。現有文獻中對于β-酪蛋白定量的測定主要集中在兩種混合物的定量檢測上，作為A2的研究存在缺陷。