[發(fā)明專利]一種乳制品中A2-β-酪蛋白含量的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810064391.1
• 申請(qǐng)日: 2018-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108181399B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉虎傳;譚蓮英;郭建;范光彩;錢(qián)成林;張海濤;宋艷梅;夏忠悅;林永裕;劉論;唐果;方瓊燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新希望乳業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 四川力久律師事務(wù)所 51221
• 代理人: 陳明龍

1.一種乳制品中A2-β-酪蛋白含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

S1、準(zhǔn)備樣品和標(biāo)準(zhǔn)品：

101樣品準(zhǔn)備：如果是奶粉則加水配制成乳液，將乳液或牛乳離心脫脂；加入緩沖液，渦旋混勻，靜置10-120min，離心5-20min；取下清液，加入緩沖液定容，混勻，用0.45μmPTFE濾膜過(guò)濾過(guò)濾，待上機(jī)檢測(cè)；

102標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：稱取αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)品各1mg至三個(gè)1.5mL離心管中，加入緩沖液，溶解均勻，加入緩沖液定容，過(guò)濾，得到已知酪蛋白濃度的待上機(jī)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品；

S2、色譜檢測(cè)：

采用高效液相色譜依次檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品中各個(gè)酪蛋白的保留時(shí)間，確定樣品中相應(yīng)酪蛋白成分的保留時(shí)間以及峰面積，計(jì)算各種酪蛋白的含量；

色譜參數(shù)如下：

色譜柱：ZORBAX 300A Stalle Bond 300SB-C8 4.6*250 5μm；

采用梯度洗脫程序進(jìn)行洗脫，流動(dòng)相A：0.1％三氟乙酸、流動(dòng)相B：0.1％乙腈，洗脫程序：

時(shí)間/min	流動(dòng)相A/％	流動(dòng)相B/％	流速/mL/min
0	75.7	24.3	1
2	71.2	28.8	1
17	64.8	35.2	1
30	61.8	38.2	1
45	55.0	45.0	1
48	46.0	54.0	1
53	46.0	54.0	1
55	75.7	24.3	1
65	75.7	24.3	1

進(jìn)樣量：50μL；

柱溫：40℃；

檢測(cè)波長(zhǎng)：241nm；

所述β-酪蛋白通過(guò)以下分離純化方法制備得到，具體制備過(guò)程包括以下步驟：

(B1)將已知A1-β-酪蛋白牛奶或已知A2-β-酪蛋白牛奶，1-6℃冷凍離心，取下層脫脂奶升溫至30-35℃，調(diào)節(jié)pH＝11-11.5，攪拌，加入鈣鹽溶液使奶樣中鈣離子濃度為0.05-0.07mol/L；

(B2)調(diào)節(jié)pH＝7.0-7.5，離心，傾倒上層清液，加入20-60mL水?dāng)嚢柚凉腆w蛋白呈乳濁液，離心，傾倒上清液，再次加入20-60mL水?dāng)嚢柚凉腆w蛋白呈乳濁液，離心，傾倒上清液；

(B3)將固體蛋白加入80-150mL pH＝11-12的堿性水溶液，攪拌溶解，降溫至1-6℃，保溫1-5h；

(B4)調(diào)節(jié)pH＝4.55-4.65，1-6℃冷凍離心，收集上清液，升溫至28-34℃，保持10-50min；

(B5)離心，收集沉淀，用水洗滌，丙酮洗滌，30-50℃烘干或者冷凍干燥，得到A1-β-酪蛋白或A2-β-酪蛋白，冷凍保存。