[發(fā)明專利]一種痕量檢測汞離子的熒光生物傳感器試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810061633.1
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108251506B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設計）人: 婁大偉;關雅南;張浩;祝波;王希越;連麗麗;高文秀;劉旭影;徐陽
• 申請（專利權）人: 吉林化工學院
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682
• 代理公司: 北京國林貿(mào)知識產(chǎn)權代理有限公司 11001
• 代理人: 李瑾;李連生

本發(fā)明公開了一種痕量檢測汞離子的熒光生物傳感器試劑盒及檢測方法，試劑盒中的試劑包括：單鏈DNA1、PBS緩沖溶液、Mg²⁺溶液、核酸外切酶III、單鏈DNA2、抗壞血酸鈉溶液、NaCl溶液、CuSO₄溶液，DNA1核苷酸序列為TTTCGTCATGGGTTGACGTTT，DNA2核苷酸序列為CGTCAACCCATGACG。檢測方法通過制備雙鏈DNA模板、合成DNA?Cu納米簇，基于“T?Hg²⁺?T”錯配結構與核酸外切酶III結合，構建熒光生物傳感器，實現(xiàn)對汞離子的痕量檢測。本發(fā)明提供的痕量檢測汞離子的熒光生物傳感器試劑盒及檢測方法，檢測靈敏度高，可以顯著降低汞離子檢測限。

技術領域

本發(fā)明屬于熒光生物傳感器技術領域，具體為一種痕量檢測汞離子的熒光生物傳感器試劑盒及檢測方法。

背景技術

汞及其化合物是劇毒性的環(huán)境污染物，可對人類的身體健康構成不同程度的危害。極微量的汞金屬就能引發(fā)生物體內(nèi)自由基過度激增，產(chǎn)生嚴重的惡心、嘔吐、腹痛以及腎功能損傷等生理現(xiàn)象，甚至導致消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)紊亂。目前，Hg²⁺的傳統(tǒng)檢測方法主要有電感耦合等離子體質譜法、原子熒光光譜法、冷原子吸收法等，這些方法雖然可以有效的檢測汞離子，但是存在設備昂貴、操作復雜、成本高、靈敏度低等問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于構建并制備一種新型的可用于檢測Hg²⁺的熒光生物傳感器，將銅納米簇材料與核酸外切酶III循環(huán)放大技術相結合，通過對顯著下降的熒光強度的檢測實現(xiàn)對Hg²⁺的超高靈敏度檢測。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的：

一種痕量檢測汞離子的熒光生物傳感器試劑盒，試劑盒中的試劑包括：單鏈DNA1、PBS緩沖溶液、Mg²⁺溶液、核酸外切酶III、單鏈DNA2、抗壞血酸鈉溶液、NaCl溶液、CuSO₄溶液；DNA1核苷酸序列為TTTCGTCATGGGTTGACGTTT，DNA2核苷酸序列為CGTCAACCCATGACG。

進一步的，單鏈DNA1濃度為100～1000nM，單鏈DNA2濃度為100～1000nM，PBS緩沖溶液pH7.4。

一種痕量檢測汞離子的熒光生物檢測方法，所用試劑包括單鏈DNA1、PBS緩沖溶液、Mg²⁺溶液、核酸外切酶III、單鏈DNA2、抗壞血酸鈉溶液、NaCl溶液、CuSO₄溶液，所述單鏈DNA1，單鏈DNA2，DNA1核苷酸序列為TTTCGTCATGGGTTGACGTTT，DNA2核苷酸序列為CGTCAACCCATGACG；檢測步驟包括：

1)制備雙鏈DNA模板：將單鏈DNA1與Hg²⁺溶液、PBS緩沖溶液和Mg²⁺溶液混合，在37℃條件下反應，所述Hg²⁺溶液為待檢測樣品或不同濃度的Hg²⁺標準溶液；將核酸外切酶III加入到該混合液中，在37℃條件下孵育，再放入80℃水浴中反應；在混合溶液中加入單鏈DNA2，反應得雙鏈DNA溶液；

2)合成DNA-Cu納米簇：將含有PBS、抗壞血酸鈉和NaCl的混合溶液加入到上述雙鏈DNA溶液中；經(jīng)過振動攪拌后，再加入CuSO₄溶液，并在37℃條件下靜置，熒光Cu納米簇形成，得到熒光強度待檢測液；

3)將步驟2)所得的熒光強度待檢測液于波長570nm條件下檢測熒光強度；

步驟1)中的Hg²⁺溶液為不同濃度Hg²⁺標準溶液，經(jīng)過步驟2)得到多個熒光強度待檢測液，經(jīng)過步驟3)測得不同的熒光強度，并繪制出Hg²⁺測定的標準曲線；步驟1)中的Hg²⁺溶液為待檢測樣品，通過1)、2)、3)步驟，得到熒光強度值，通過標準曲線查出對應的Hg²⁺濃度。