[發(fā)明專(zhuān)利]一種痕量檢測(cè)汞離子的熒光生物傳感器試劑盒及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810061633.1
• 申請(qǐng)日: 2018-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108251506B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 婁大偉;關(guān)雅南;張浩;祝波;王希越;連麗麗;高文秀;劉旭影;徐陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 吉林化工學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/682
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/682
• 代理公司: 北京國(guó)林貿(mào)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11001
• 代理人: 李瑾;李連生

1.一種痕量檢測(cè)汞離子的熒光生物傳感器試劑盒，其特征在于：試劑盒中的試劑包括：?jiǎn)捂淒NA1、PBS緩沖溶液、Mg²⁺溶液、核酸外切酶III、單鏈DNA2、抗壞血酸鈉溶液、NaCl溶液、CuSO₄溶液；DNA1核苷酸序列為T(mén)TTCGTCATGGGTTGACGTTT；DNA2核苷酸序列為CGTCAACCCATGACG。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光生物傳感器試劑盒，其特征在于：?jiǎn)捂淒NA1濃度為100～1000nM，單鏈DNA2濃度為100～1000nM，PBS緩沖溶液pH7.4。

3.一種痕量檢測(cè)汞離子的熒光生物檢測(cè)方法，其特征在于：所用試劑包括單鏈DNA1、PBS緩沖溶液、Mg²⁺溶液、核酸外切酶III、單鏈DNA2、抗壞血酸鈉溶液、NaCl溶液、CuSO₄溶液，DNA1核苷酸序列為T(mén)TTCGTCATGGGTTGACGTTT，DNA2核苷酸序列為CGTCAACCCATGACG；檢測(cè)步驟包括：

1） 制備雙鏈DNA模板：將單鏈DNA1與Hg²⁺溶液、PBS緩沖溶液和Mg²⁺溶液混合，在37^OC條件下反應(yīng)，所述Hg²⁺溶液為待檢測(cè)樣品或不同濃度的Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液；將核酸外切酶III加入到該混合液中，在37^OC條件下孵育，再放入80^OC水浴中反應(yīng)；在混合溶液中加入單鏈DNA2，反應(yīng)得雙鏈DNA溶液；

2） 合成DNA-Cu納米簇：將含有PBS 、抗壞血酸鈉和NaCl的混合溶液加入到上述雙鏈DNA溶液中；經(jīng)過(guò)振動(dòng)攪拌后，再加入CuSO₄溶液，并在 37^OC條件下靜置，熒光Cu納米簇形成，得到熒光強(qiáng)度待檢測(cè)液；

3）將步驟2）所得的熒光強(qiáng)度待檢測(cè)液于波長(zhǎng)570nm條件下檢測(cè)熒光強(qiáng)度；

步驟1）中的Hg²⁺溶液為不同濃度Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，經(jīng)過(guò)步驟2)得到熒光強(qiáng)度待檢測(cè)液，經(jīng)過(guò)步驟3）測(cè)得不同的熒光強(qiáng)度，并繪制出Hg²⁺測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線；步驟1）中的Hg²⁺溶液為待檢測(cè)樣品時(shí)，通過(guò)1）、2）、3）步驟，得到熒光強(qiáng)度值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出對(duì)應(yīng)的Hg²⁺濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的痕量檢測(cè)汞離子的熒光生物檢測(cè)方法，其特征在于：所述單鏈DNA1濃度為100～1000nM，單鏈DNA2濃度為100～1000nM；檢測(cè)步驟包括：

1） 制備雙鏈DNA模板：將10μL單鏈DNA1與5μLHg²⁺溶液、40μL濃度為20mmol/L pH7.4的PBS緩沖溶液和10μL 5mmol/ L 的MgCl₂溶液混合，在37^OC條件下反應(yīng)5min，所述Hg²⁺溶液為待檢測(cè)樣品或不同濃度的Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液； 10μL 核酸外切酶III 33U加入到該混合液中，在37^OC條件下孵育1小時(shí)，再放入80^OC水浴中，反應(yīng)5min；在混合溶液中加入10μL單鏈DNA2，反應(yīng)20min得雙鏈DNA溶液；

2）合成DNA-Cu納米簇：將含有20mmol/L PBS 、0.5～2.5mmol/L抗壞血酸鈉和1mol/LNaCl的混合溶液加入到上述雙鏈DNA溶液中；經(jīng)過(guò)振動(dòng)攪拌后，再加入10μL濃度為40μM～200μM 的CuSO₄溶液，并在 37^OC條件下靜置10min，熒光Cu納米簇形成，得到熒光強(qiáng)度待檢測(cè)液；

3） 將步驟2）所得的熒光強(qiáng)度待檢測(cè)液于波長(zhǎng)570nm條件下檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的痕量檢測(cè)汞離子的熒光生物檢測(cè)方法，其特征在于：步驟1）單鏈DNA1的濃度為 750nM；步驟2）單鏈DNA2的濃度為 750nM。