[發明專利]一種磁珠法細菌基因組DNA提取試劑盒及應用在審
| 申請號： | 201810061626.1 | 申請日： | 2018-01-23 |
| 公開（公告）號： | CN108220284A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發明（設計）人： | 趙大顯;簡少卿;張翠真;陳志和;毛振方;程海燕;陳娟 | 申請（專利權）人： | 南昌大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115 | 代理人： | 施秀瑾 |
| 地址： | 330031 江西省*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 緩沖液 細菌基因組DNA提取試劑盒 磁珠法 試劑盒 分子生物學技術 細菌基因組DNA 緩沖液系統 超順磁性 磁珠吸附 發明試劑 納米磁珠 細菌裂解 單分散 硅羥基 洗脫液 磁珠 洗脫 懸液 洗滌 應用 配合 | ||
1.一種磁珠法細菌基因組DNA提取試劑盒，其特征是包括磁珠懸液A、緩沖液B、緩沖液C、緩沖液D、緩沖液E、洗脫液六種組分；
所述磁珠懸液A中使用的磁珠為單分散、超順磁性硅羥基納米磁珠，磁珠粒徑300-500nm，濃度100mg/mL，磁珠懸浮在20%的乙醇中；
所述緩沖液B終濃度組成為：2-5mol/L鹽酸胍、1-2%月桂酰肌氨酸鈉、200-500μg/mL核糖核酸酶A、0.05-0.1mol/L檸檬酸鈉，溶劑為無菌去離子水，緩沖液B pH為6.5-8.0；
所述緩沖液C終濃度組成為：1-2mol/L異硫氰酸胍、60-80%異丙醇、1-5%聚乙二醇、0.02-0.05mol/L檸檬酸鈉，溶劑為無菌去離子水，緩沖液C pH為5.5-7.5；
所述緩沖液D終濃度組成為：1-2mol/L醋酸鈉、5-8%聚乙二醇，溶劑為無菌去離子水，緩沖液D pH為5.0-6.0；
所述緩沖液E終濃度組成為：0.05-0.1mol/L氯化鈉、60-80%乙醇、10mmol/L三羥甲基氨基甲烷，溶劑為無菌去離子水，緩沖液D pH為7.0-7.5；
所述洗脫液為：無菌去離子水或10mmol/L三羥甲基氨基甲烷，洗脫液pH為7.0-8.0。
2.權利要求1所述的磁珠法細菌基因組DNA提取試劑盒的應用，其特征是按如下步驟：
步驟一，向離心管中加入100-500μL細菌培養液，然后加入初始菌液相同體積的緩沖液B，混勻，裂解15分鐘；
步驟二，向離心管中加入10μL 磁珠懸液A和2倍初始菌液體積的緩沖液C，混勻，室溫放置3分鐘；
步驟三，將離心管置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至孔壁上之后，吸棄上清，從磁力架上取出離心管；
步驟四，加入500μL 緩沖液D，混勻，將離心管置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至管壁上后，吸棄上清，然后從磁力架上取出離心管；
步驟五，加入500μL 緩沖液E，混勻，將離心管置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至管壁上后，吸棄上清，然后從磁力架上取出離心管；
步驟六，重復步驟五1次；
步驟七，將離心管置于55℃恒溫箱中干燥5-7 分鐘至離心管內無液體殘留；
步驟八，加入50-100μL洗脫液，充分懸浮磁珠5分鐘；
步驟九，取出離心管并置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至管壁上后，小心吸取上清至新的離心管，即獲得DNA產物。
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