[發明專利]一種熱穩定性提高的果聚糖蔗糖酶突變體

有效

• 申請號: 201810060609.6
• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN108018269B
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 沐萬孟;張文立;徐煒;江波;張濤
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/02;C12P19/04;C12P19/18;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種果聚糖蔗糖酶的突變體酶，其特征在于，是將來源于Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶的第404位的谷氨酸Glu替換成色氨酸Trp，所述突變體酶的氨基酸序列如SEQID No:4所示。

2.根據權利要求1所述的一種果聚糖蔗糖酶的突變體酶，其特征在于，編碼所述果聚糖蔗糖酶的突變體酶的基因序列如SEQ ID No:3所示。

3.編碼權利要求1或2所述突變體酶的基因。

4.攜帶權利要求3所述基因的質粒。

5.攜帶權利要求3所述基因的微生物細胞。

6.一種表達權利要求1或2所述突變體酶的重組大腸桿菌，其特征在于，以大腸桿菌BL21(DE3)為宿主，轉化重組表達質粒pET-22b(+)-E404W。

7.權利要求1或2所述突變體酶的制備方法，其特征在于，其具體步驟為：

(1)在Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶模擬結構的基礎上確定突變位點；

(2)以重組質粒pET-22b(+)-Brsp-LS為模板，設計正向和反向引物，使用兩步法對Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶進行定點突變，所述重組質粒pET-22b(+)-Brsp-LS的制備方法為：合成SEQ ID No:1所示的果聚糖蔗糖酶levan酶的基因片段BN1221_00994c，并連接至pET-22b(+)的酶切位點Nde I和Xho I之間，獲得重組質粒pET-22b(+)-Brsp-LS；

(3)將構建成功的突變體質粒導入表達宿主E.coliBL21(DE3)，挑選驗證后的陽性單克隆進行誘導表達培養；

(4)離心菌體，重懸后超聲破碎，鎳離子親和層析純化得到突變體酶E404W。

8.權利要求1或2所述突變體酶在制備果聚糖、葡萄糖或果糖中的應用。

9.權利要求4所述質粒在制備果聚糖、葡萄糖或果糖中的應用。

10.權利要求5所述微生物細胞在制備果聚糖、葡萄糖或果糖中的應用。

11.權利要求1或2所述突變體酶在化學、食品和制藥領域中的應用。

12.權利要求6所述重組大腸桿菌在制備果聚糖、葡萄糖或果糖中的應用。