[發明專利]一種過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810060438.7
• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN108251378B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 張斌;尤本帥;許文榮;錢暉;董海新;張顥;金呈強
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/861;A61K35/28;A61P35/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明涉及一種過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體及其制備方法和應用，屬于胃癌藥物制備技術領域。本發明提供的過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體，是采用PTGDS過表達腺病毒轉染間質干細胞后，經培養、分離純化后獲得。本發明提供的過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體高效靶向胃癌細胞，抑制胃癌細胞的生長和遷移，進而抑制腫瘤生長。

技術領域

本發明涉及胃癌藥物制備技術領域，具體涉及一種過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體及其制備方法和應用。

背景技術

胃癌在全球范圍內是第五大常見的惡性腫瘤，死亡率居第三位，而在我國，胃癌高居最常見癌癥的第三位，已經是第二大癌癥致死原因。目前臨床治療胃癌藥物主要有5-氟尿嘧啶等化療藥物，這些藥物能夠顯著地抑制腫瘤的進展，但是由于其對腫瘤組織的特異性差，而有很強的副作用。因此，我們亟待需要一種既具有抗胃癌細胞生長又具有靶向治療作用的“生物制劑”。

PGD2是前列腺素的一種，是重要的細胞信號分子，它的合成主要通過以下的生物過程：細胞膜上的磷脂酶A轉化成花生四烯酸，后者在環氧化酶(包括COX-1和COX-2)的催化下，被分解成不穩定的中間產物前列腺素H2，前列腺素H2又被三種不同的酶：前列腺素D合成酶(PGDS)，前列腺素E合成酶及前列腺素F合成酶轉化為更穩定的PGD2，PGE2，PGF2。PGDS前列腺素系列的關鍵酶系，又包括脂質運載蛋白型PGD合成酶(L-PTGDS)和造血型PGD合成酶(H-PTGDS)。雖然現有報道公開了在腫瘤細胞中過表達PTGDS可以有效地控制體外胃癌細胞的生長，具有治療胃癌的潛力(專利申請號：201611203449.3)，但現有技術仍缺少實際能夠高效靶向治療胃癌的藥物。

發明內容

本發明的目的在于提供一種過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體及其制備方法和應用。本發明提供的過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體高效靶向胃癌細胞，抑制胃癌細胞的生長和遷移，進而抑制腫瘤生長。

本發明提供了一種過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體，所述過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體的制備方法包括以下步驟：

1)將PTGDS過表達腺病毒轉染間質干細胞，經篩選獲得PTGDS過表達間質干細胞；

2)將所述步驟1)得到的PTGDS過表達間質干細胞接種至含胎牛血清的低糖DMEM培養基中進行第一擴增培養，待細胞融合至70～80％時，采用無血清培養基進行第二擴增培養，48h后收集上清，離心去除漂浮活細胞，得到含外泌體的上清；

3)采用蔗糖密度梯度離心法對所述步驟2)得到的含外泌體的上清進行分離純化，得到過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體。

在本發明中，所述步驟1)中，PTGDS過表達腺病毒以10⁸的滴度進行轉染。

在本發明中，步驟2)所述含胎牛血清的低糖DMEM培養基中含質量濃度為10％的胎牛血清。

優選的是，步驟2)所述離心的條件為300×g離心10min。

優選的是，步驟3)所述分離純化包括以下步驟：

a)將所述含外泌體上清在2000×g離心10min，得到去除細胞碎片的上清；

b)將所述去除細胞碎片的上清在10000×g離心30min，得到去除細胞器的上清；

c)將步驟b)得到的去除細胞器的上清進行第一濃縮，得到第一濃縮液；

d)將步驟c)得到的第一濃縮液移至1/4倍體積的蔗糖/重水密度墊，100000×g離心3h，收集底部的蔗糖/重水層，進行第二濃縮，得到第二濃縮液；

e)將所述步驟d)得到的第二濃縮液進行洗滌，過濾除菌后得到過表達PTGDS基因的間質干細胞外泌體。