[發(fā)明專利]工程化的肉毒神經(jīng)毒素

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810059379.1
• 申請(qǐng)日: 2013-03-13
• 公開（公告）號(hào): CN108178801B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董民;彭立勝;波爾·埃里克·古斯塔夫·斯滕馬克;羅尼·佩爾-阿爾內(nèi)·伯恩特森
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈佛大學(xué)校長(zhǎng)及研究員協(xié)會(huì)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N9/52
• 代理公司: 北京信慧永光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11290
• 代理人: 王芬;張淑珍

本文公開了肉毒神經(jīng)毒素(BoNT)多肽，所述多肽具有修飾的肉毒桿菌血清型B的受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(B?H_C)，所述修飾的肉毒桿菌血清型B的受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含對(duì)應(yīng)于血清型B，菌株1中的置換突變的一個(gè)或多個(gè)置換突變：V1118M、Y1183M、E1191M、E1191I、E1191Q、E1191T、S1199Y、S1199F、S1199L、S1201V、或它們的組合。特定的突變組合包括E1191M和S1199L、E1191M和S1199Y、E1191M和S1199F、E1191Q和S1199L、E1191Q和S1199Y、或E1191Q和S1199F。還公開了其它置換突變。還公開了分離的修飾的受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、嵌合分子、藥物組合物、以及使用它們的方法。

本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2013年03月13日、發(fā)明名稱為“工程化的肉毒神經(jīng)毒素”的申請(qǐng)?zhí)枮?01380040738.4專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

根據(jù)35U.S.C.§119(e)，本申請(qǐng)要求2012年5月30日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/653,214的優(yōu)先權(quán)，以引用的方式將其整體內(nèi)容并入本文。

政府支持

本發(fā)明是美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院授予的NCRR RR000168的政府支持下完成的。美國(guó)政府對(duì)本發(fā)明享有一定的權(quán)利。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及針對(duì)神經(jīng)肌肉障礙(neuromuscular disorders)的治療(therapeutics)的領(lǐng)域。

背景技術(shù)

肉毒神經(jīng)毒素(botulinum neurotoxin)是一個(gè)細(xì)菌毒素家族，包括七個(gè)主要血清型(BoNT/A-G)¹。這些毒素通過阻斷由神經(jīng)元釋放神經(jīng)遞質(zhì)而發(fā)揮作用，從而使動(dòng)物和人麻痹。近年來，BoNT已被廣泛用于治療越來越多的醫(yī)學(xué)病癥：局部注射微量毒素可以在目標(biāo)區(qū)域削弱神經(jīng)元活性(neuronal activity)，這在許多醫(yī)學(xué)病癥中、以及對(duì)于美容目的而言可能是有益的^2-4。

BoNT/A和BoNT/B是僅有的兩種目前經(jīng)FDA批準(zhǔn)用于人的BoNT^2-4。這些是從細(xì)菌純化而來、未經(jīng)任何序列修飾(定義為野生型，WT)的毒素。隨著BoNT的應(yīng)用不斷增加，已報(bào)道了多種限制和副作用。主要限制是在患者中產(chǎn)生中和抗體，這使得隨后的治療無效化⁵。終止使用BoNT往往使患者缺少其它有效的治療/減輕其障礙的途徑。抗體應(yīng)答的可能性與毒素劑量和注射頻率二者直接相關(guān)⁵。因此，這種限制主要發(fā)生在涉及相對(duì)高劑量毒素的肌肉痙攣治療中。與此相一致的是，在使用非常低劑量毒素的美容應(yīng)用中尚未觀察到抗體應(yīng)答⁵。

主要的副作用也往往與治療肌肉痙攣、而非美容應(yīng)用相關(guān)。這是因?yàn)楦弊饔弥饕怯啥舅財(cái)U(kuò)散至身體其它區(qū)域所致，并且毒素?cái)U(kuò)散的可能性與注射劑量直接相關(guān)。副作用的范圍從短暫的非嚴(yán)重事件(如眼瞼下垂和復(fù)視)直至危及生命的事件甚至死亡^6，7。在由Sidney Wolfe博士于2008年向FDA提交的請(qǐng)求書中，記載了共180例嚴(yán)重不良事件，其中16人死亡。因此，目前FDA要求在所有BoNT產(chǎn)品上標(biāo)注“黑框警告”，強(qiáng)調(diào)毒素蔓延的風(fēng)險(xiǎn)，這一要求是在歐盟頒布了類似警告后作出的。

由于中和抗體的產(chǎn)生和毒素?cái)U(kuò)散均與注射劑量直接相關(guān)，降低毒素劑量(同時(shí)保持相同水平的毒素活性)是高度期望的，這意味著必須增強(qiáng)單個(gè)毒素分子的效力。此類對(duì)于神經(jīng)元具有改進(jìn)的特異性的修飾BoNT也將減少任何潛在的由于非特異性進(jìn)入其它細(xì)胞類型而致的脫靶效應(yīng)。