[發明專利]一種人胚胎體外培養液及培養系統

有效

• 申請號: 201810059073.6
• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN108251353B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 林小貞
• 申請（專利權）人: 深圳韋拓生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12M1/00;C12M1/22
• 代理公司: 深圳市德錦知識產權代理有限公司 44352
• 代理人: 丁敬偉

1.一種人胚胎細胞體外培養液，所述培養液包括抑菌成份硫酸慶大霉素0.05g/L；pH指示劑酚紅0.01g/L；離子螯合劑乙二胺四乙酸二鈉0.01mM/L；營養成份氯化鈉103.46mM/L，氯化鉀5.88mM/L，磷酸二氫鉀3.26mM/L，二水氯化鈣0.98mM/L，二水硫酸鎂0.87M/L，碳酸氫鈉22.75mM/L，丙酮酸鈉3.34mM/L，乳酸鈉5mM/L，葡萄糖0.2mM/L，檸檬酸鈉0.48mM/L，丙胺酰谷氨酰胺0.55mM/L，精氨酸0.48mM/L，胱氨酸0.02mM/L，異亮氨酸0.35mM/L，亮氨酸0.4mM/L，賴氨酸0.1mM/L，蛋氨酸0.14mM/L，苯丙氨酸0.1mM/L，蘇氨酸0.09mM/L，色氨酸0.25mM/L，酪氨酸0.1mM/L，纈氨酸0.3mM/L，丙氨酸0.07mM/L，天冬氨酸0.03mM/L，谷氨酸0.07mM/L，甘氨酸0.1mM/L，脯氨酸0.07mM/L，絲氨酸0.07mM/L，肌醇1.49mM/L，?；撬?.28mM/L，人血清白蛋白5g/L。

2.如權利要求1所述的培養液，其中配制所述培養液所用的溶劑為超純水。

3.一種制備如權利要求1所述的一種人胚胎細胞體外培養液的方法，包括以下步驟：

(1)以超純水為溶劑，分別按比例加入所述的氯化鈉、氯化鉀、磷酸二氫鉀、二水氯化鈣、二水硫酸鎂、乙二胺四乙酸二鈉，必需氨基酸和非必需氨基酸、葡萄糖、肌醇、檸檬酸鈉、牛磺酸、丙酮酸鈉、乳酸鈉配成基礎液A；

(2)向基礎液A中按比例加入所述的硫酸慶大霉素、酚紅，最后加入碳酸氫鈉，配成基礎液B；

(3)上述基礎液B放入5％二氧化碳，5％氧氣及90％氮氣的培養箱內平衡過夜后在超凈臺內用真空過濾泵經0.2μm過濾膜過濾得到原液；

(4)調節上述原液pH值7.3±0.1，滲透壓257～273mOsm/kg，加入人血清白蛋白并混勻，在超凈臺內分裝、封口，包裝后得到成品，并4℃保存。

4.如權利要求3所述的方法，還包括在配制所述培養液前，將配制所用到的器具高溫滅菌并烘干備用的步驟。

5.一種培養人胚胎的體外培養系統，所述體外培養系統包括權利要求1所述的人胚胎體外培養液以及放置所述培養液的培養裝置。

6.如權利要求5所述的體外培養系統，其中所述培養裝置為培養皿。

7.如權利要求6所述的體外培養系統，其中所述培養皿的底部設有培養區，所述培養區包括第一培養區和第二培養區，所述第一培養區設有第一培養孔，所述第二培養區設有第二培養孔，所述第一培養孔為尖頭孔，所述第二培養孔的底部為平底，所述第二培養孔的口部內徑大于底部內徑。

8.如權利要求7所述的體外培養系統，其中所述第二培養孔是用于第0-1天的胚胎培養，第一培養孔用于第1-5天的胚胎培養。