[發明專利]一種L-絲-L-酪環二肽和D-絲-L-酪環二肽的分離提純方法

有效

• 申請號: 201810058986.6
• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN108586363B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 劉遜
• 申請（專利權）人: 蘇州衛生職業技術學院
• 主分類號: C07D241/08
• 分類號: C07D241/08
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

本發明提供了一種L?絲?L?酪環二肽和D?絲?L?酪環二肽的分離提純方法，包括以下步驟：（1）將穿山甲藥材砂炒炮制為炮山甲或醋山甲；（2）將炮山甲或醋山甲打粉，過100目篩，然后通過第一溶劑提取后脫脂得到提取液和藥渣，將第一溶劑提取后的藥渣再通過第二溶劑提取得到提取液，將兩次的提取液合并，減壓濃縮得到浸膏；（3）將浸膏用甲醇溶解拌硅膠上柱，并用TLC碘顯色監控；（4）將步驟（3）得到的流份用反相高效液相色譜純化，以乙睛?水流動相，洗脫液減壓濃縮除去乙睛和水，干燥，得到L?絲?L?酪環二肽和D?絲?L?酪環二肽。

技術領域

本發明涉及中藥有效成分提取領域，具體涉及一種L-絲-L-酪環二肽和D-絲-L-酪環二肽的分離提純方法。

背景技術

穿山甲來源于鯪鯉科動物中華穿山甲的鱗甲，需砂炒方可入藥，有活血消癥之功，臨床療效確切。穿山甲在高溫砂炒過程中，新增了L-絲-L-酪環二肽，D-絲-L-酪環二肽。

環二肽作為一類活性物質，目前受了越來越多的關注，表現出了抗炎、抗腫瘤、抗凝、神經保護、免疫調節等多種顯著的生物活性。由于角蛋白特殊的分子結構使角蛋白難以消化分解,當把角蛋白分解為多肽或氨基酸時方可消化吸收，穿山甲角蛋白在炮制過程中，由于溫度升高，蛋白質吸收的能量超過了分子間作用力，導致肽鍵斷裂，從而引起蛋白變性。蛋白炮制產物進入人體后，腸道內對蛋白質的利用并不局限于游離氨基酸的形式，而大部分是以寡肽形式吸收的，在消化過程中，L-絲-L-酪環二肽，D-絲-L-酪環二肽可以通過腸道吸收而進入血液循環從而在全身發揮作用，也可以在胃腸道中產生局部效應，吸收速度比相同組成的氨基酸更快。其吸收機制優于蛋白質和氨基酸。

發明內容

要解決的技術問題：本發明的目的是提供從穿山甲中簡便易行分離純化L-絲-L-酪環二肽和D-絲-L-酪環二肽的方法。

技術方案：一種L-絲-L-酪環二肽和D-絲-L-酪環二肽的分離提純方法，包括以下步驟：

（1）將穿山甲藥材砂炒炮制為炮山甲或醋山甲；

（2）將炮山甲或醋山甲打粉，過100目篩，然后通過第一溶劑提取后脫脂得到提取液和藥渣，將第一溶劑提取后的藥渣再通過第二溶劑提取得到提取液，將兩次的提取液合并，減壓濃縮得到浸膏；

（3）將浸膏用甲醇溶解拌硅膠上柱，固定相為200-300目硅膠，流動相為二氯甲烷：丙酮：乙醇體積比為1-20:1-2:1洗脫，并用TLC碘顯色監控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的體積比為10:2:1的流份；

（4）將步驟（3）得到的流份用反相高效液相色譜純化，以乙睛-水流動相，洗脫液減壓濃縮除去乙睛和水，干燥，得到純度96%以上的L-絲-L-酪環二肽和D-絲-L-酪環二肽。

進一步的，所述步驟（2）中第一溶劑為二氯甲烷，將炮山甲或醋山甲粉加入5-10倍量的二氯甲烷提取3-5次，每次1小時。

進一步的，所述步驟（2）中第二溶劑為濃度為50wt%的乙醇，將藥渣加入5-10倍重量份的50%乙醇提取4-5次，每次1小時。

進一步的，所述步驟（3）中每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅膠拌勻。

進一步的，所述步驟（4）中反相高效液相色譜條件為：柱溫30℃，檢測波長210nm或230nm。

進一步的，所述步驟（4）中乙睛-水流動相為濃度為1-4wt%乙腈水溶液，洗脫液洗脫流速為2-6ml/min，洗脫時間20-60分鐘。

有益效果：本發明以穿山甲炮制品為原料分離純化L-絲-L-酪環二肽，D-絲-L-酪環二肽，方法簡單，成本低，具有可持續性，制得的化L-絲-L-酪環二肽，D-絲-L-酪環二肽純度高均大于97%和96%，對進一步開展 L-絲-L-酪環二肽，D-絲-L-酪環二肽藥理學研究和穿山甲替代資源的尋找具有重要意義。

附圖說明