[發(fā)明專利]一種以聚乙烯亞胺穩(wěn)定的納米鉑粒子檢測葡萄糖的方法

有效

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• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN108375573B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王龍剛;賴翔;趙禹;崔艷帥
• 申請（專利權(quán)）人: 燕山大學(xué)
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 秦皇島一誠知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 13116
• 代理人: 劉建年

一種以聚乙烯亞胺穩(wěn)定的納米鉑粒子檢測葡萄糖的方法，其主要是先通過將聚乙烯亞胺溶液和四氯鉑酸鉀共孵育，加入硼氫化鈉還原而制備成聚乙烯亞胺穩(wěn)定的納米鉑粒子，取離心管將葡萄糖氧化酶與不同濃度梯度葡萄糖溶液混合，產(chǎn)生過氧化氫；另取離心管，加入聚乙烯亞胺穩(wěn)定的納米鉑粒子的水溶液、四甲基聯(lián)苯胺和緩沖溶液進行反應(yīng)；兩個離心管共混后，無色的四甲基聯(lián)苯胺被氧化成藍色氧化態(tài)四甲基聯(lián)苯胺；在葡萄糖濃度為0.1～1.0mmol/L，建立652nm處氧化態(tài)四甲基聯(lián)苯胺的吸光度與葡萄糖濃度的線性關(guān)系。本發(fā)明具有工藝簡單，條件溫和，效率高，檢測成本低，反應(yīng)易于控制等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種檢測葡萄糖的方法。

背景技術(shù)

血液中的葡萄糖(血糖)是生物體內(nèi)最為基礎(chǔ)的能源物質(zhì)。但是隨著人們生活水平的提高，高血糖乃至糖尿病成為人類健康的殺手，因此靈敏和低成本檢測血糖值的對糖尿病的診療有著重要的意義。

色譜法是檢測葡萄糖含量的標(biāo)準(zhǔn)方法，但存在成本高、操作復(fù)雜等缺點。電化學(xué)傳感器法則存在使用壽命相對較短的缺點。比色法則具有操作簡單，對葡萄糖的選擇性較高的優(yōu)點。尤其是近幾年來，仿生酶能夠替代過氧化物酶檢測葡萄糖使得比色法更加簡單和成本低。納米鉑粒子能夠做為仿生酶模擬過氧化物酶的特性。但是，其具有高比表面積，這導(dǎo)致它容易發(fā)生團聚。采用聚合物模板能夠提高納米鉑粒子的穩(wěn)定性，尤其是粒徑小于10nm的鉑粒子。LorenzH等人以分子量為10000的聚乙烯亞胺為模板，成功制備均粒徑為10nm鉑粒子。但是，此鉑粒子的粒徑仍然較大，這導(dǎo)致單位質(zhì)量的鉑粒子的催化效率仍然較低。因此，亟需制備出具有更小粒徑和穩(wěn)定的納米鉑粒子。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種制備工藝簡單、反應(yīng)條件溫和、重現(xiàn)性好、操作簡便、檢測成本低的以聚乙烯亞胺穩(wěn)定的納米鉑粒子檢測葡萄糖的方法。

本發(fā)明的方法如下：

(1)聚乙烯亞胺(PEI)穩(wěn)定的納米鉑粒子的制備：按1mL去離子水中加入0.5～1.0mg PEI，所用聚乙烯亞胺的分子量為70000，將PEI加入去離子水中，再加入1mol/L的鹽酸調(diào)至pH＝4,按PEI與四氯鉑酸鉀的摩爾比1：25～150的比例，將四氯鉑酸鉀加入PEI水溶液，然后在20℃，轉(zhuǎn)速500轉(zhuǎn)/分鐘的金屬浴中孵育15～25min；再按PEI與硼氫化鈉的摩爾比1：125～750的比例，將硼氫化鈉溶于0.3mol/L的氫氧化鈉水溶液中配成1mg/mL溶液，將硼氫化鈉溶液加入到上述孵育好的溶液中，在上述同樣的金屬浴條件下孵育10～15min；然后再按鹽酸與氫氧化鈉的摩爾比1：1的比例，將1mol/L的鹽酸加入到上述溶液中，調(diào)節(jié)溶液的pH至中性，溶液變色，最后在金屬浴孵育2～3h，制得聚乙烯亞胺穩(wěn)定的納米鉑粒子(PEI-Pt_n，n代表平均每一個PEI分子中穩(wěn)定的鉑原子數(shù))。

(2)葡萄糖檢測：按葡萄糖氧化酶與葡萄糖的摩爾比1：12～120的比例，將葡萄糖氧化酶(GOx)分別與濃度為0.1～1.0mmol/L葡萄糖溶液混合，在50℃下反應(yīng)30min，反應(yīng)產(chǎn)生過氧化氫(H₂O₂)；另取離心管，配置濃度為4～10μmol/L的PEI-Pt_n溶液和6mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液，按PEI-Pt_n:TMB的摩爾比為1：450～180的比例，將PEI-Pt_n、TMB加入到400μL，0.2mol/L，pH＝4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，30℃下反應(yīng)10min。將上述的PEI-Pt_n、TMB和醋酸-醋酸鈉混合緩沖溶液作為顯色劑，分別加入到每個葡萄糖溶液中，30℃下反應(yīng)20min，顯色產(chǎn)物溶液顏色為藍色，隨葡萄糖濃度增大顏色變深，用紫外可見分光光度計在652nm下測量吸光度，并以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖的濃度作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，吸光度增大的程度與葡萄糖濃度在0.1～1.0mmol/L為線性關(guān)系。