[發明專利]一種芽孢桿菌的流加補料發酵方法

有效

• 申請號: 201810055714.0
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108048387B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 馬秋剛;趙麗紅;計成;郭永鵬;鄭文革
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/20;C12N3/00;A23L5/20;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

本發明公開了屬于微生物發酵技術領域的一種芽孢桿菌的流加補料發酵方法。芽孢桿菌經一、二級種子擴大培養后接入發酵培養基中培養，期間通過補料流加碳源和基礎培養基中相對缺乏的甘氨酸、蛋氨酸、色氨酸、蘇氨酸、脯氨酸的混合物經噴霧干燥得到的每克菌粉芽孢桿菌CFU不少于1.0×10¹¹個，顯著提高單位產量，降低了單位成本。枯草芽孢桿菌ANSB471用于降解嘔吐毒素，反應48h后，嘔吐毒素降解率達到95％。

技術領域

本發明屬于微生物發酵技術領域，具體涉及一種芽孢桿菌的流加補料發酵方法。

背景技術

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)又名脫氧瓜萎鐮刀菌烯醇或嘔吐毒素，嘔吐毒素(DON)對谷物的污染居于鐮刀菌毒素之首，嚴重威脅人和家畜的健康。小麥、玉米等谷物及其副產品均易感染嘔吐毒素，加拿大、北歐地區、美國等國外地區發生率比較高，我國從南到北均可發生。有研究表明，在我國食管癌和胃癌高發地區居民飲食中嘔吐毒素污染率和含量均相當高。1998年，國際癌癥研究機構(IARC)公布評價報告中，把嘔吐毒素列為三類致癌物之一。尋求一種能夠有效地控制和解決糧食、飼料中嘔吐毒素污染的方法，才能很好地提高我國畜牧業經濟效益和改善食品安全水平。傳統的理化方法去毒都存在一些問題，如去毒效率低，導致糧食飼料中的營養損失，影響糧食、飼料感官品質，有些方法所需要的設備價格昂貴等等，從而限制了實際生產中的應用。

申請公布號為CN103243047A的發明專利公開了一株高效降解嘔吐毒素的枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis ANSB471(保藏編號CGMCC No.7344)。并公開其培養方法為，取活菌濃度為10⁹CFU/ml的枯草芽孢桿菌ANSB471 0.5-2.5ml，接種于50-100ml培養基中，在30-40℃進行搖瓶發酵培養16-24h，轉速180-220r/min，pH值7.0-7.4。取枯草芽孢桿菌的發酵液900μl，加入100μg/ml的嘔吐毒素100μl，將反應體系的pH值調節為7.2，在37℃反應48h，枯草芽孢桿菌ANSB471對嘔吐毒素的降解率達到80％。

申請公開號為CN104232526A的發明專利公開了一種枯草芽孢桿菌活菌制劑的制備工藝，枯草芽孢桿菌ANSB471活菌制備工藝需要同時兼顧活菌數和嘔吐毒素降解活性，CN104232526A中提供的發酵方法不能滿足枯草芽孢桿菌ANSB01G發揮最佳的嘔吐毒素降解特性。

發明內容

本發明為了解決上述技術問題，提出一種芽孢桿菌的流加補料發酵方法。具體技術方案如下：

一種芽孢桿菌的流加補料發酵方法，包括如下步驟：

(1)一級種子制備：取芽孢桿菌活菌菌種懸濁液接種于一級種子培養基中，然后進行培養；

(2)二級種子制備：將一級種子接種于二級種子培養基中，然后進行培養；

(3)發酵：將二級種子接種于發酵培養基中，然后進行發酵培養；

當發酵至8-10h時流加補料培養基A，發酵至12-16h時流加補料培養基B；

所述補料培養基A包含質量百分比5％-15％的碳源；

所述補料培養基B包含質量百分比5％-10％的碳源和質量百分比2.1％-11％發酵培養基中缺乏的菌種限制性氨基酸。

所述芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌。

所述一級種子培養基包括的原料為：每1000mL，胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化鈉3-6g、磷酸氫二鈉2.5-4g、七水硫酸鎂0.5-1.5g，蒸餾水1000mL，pH為7.0-7.4。