[發明專利]一種芽孢桿菌的流加補料發酵方法

有效

• 申請號: 201810055714.0
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108048387B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 馬秋剛;趙麗紅;計成;郭永鵬;鄭文革
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/20;C12N3/00;A23L5/20;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

1.一種芽孢桿菌的流加補料發酵方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)一級種子制備：取芽孢桿菌菌種懸濁液接種于一級種子培養基中，然后進行培養；

(2)二級種子制備：將一級種子接種于二級種子培養基中，然后進行培養；

(3)發酵：將二級種子接種于發酵培養基中，然后進行發酵培養；

當發酵至8-10h時流加補料培養基A，發酵至12-16h時流加補料培養基B；

所述補料培養基A包含質量百分比5％-15％的碳源；

所述補料培養基B包含質量百分比5％-10％的碳源和質量百分比2.1％-11％發酵培養基中缺乏的菌種限制性氨基酸；

所述補料培養基A和補料培養基B的流加量均為發酵培養基體積的0.1-1.0‰；所述碳源為葡萄糖，所述發酵培養基中缺乏的菌種限制性氨基酸為甘氨酸、蛋氨酸、色氨酸、蘇氨酸、脯氨酸和酪氨酸；

所述補料培養基A的的原料及用量為：葡萄糖5％-15％，培養基pH為6.5-7.5；

所述補料培養基B的原料及用量為：葡萄糖5％-10％，甘氨酸1.0％-4.0％，蛋氨酸0.5％-2.0％，色氨酸0.5％-2.0％，蘇氨酸0.1％-1.0％，脯氨酸0.0％-1.0％，酪氨酸0.0％-1.0％，培養基pH為6.2-7.5；

所述芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌；所述芽孢桿菌能夠降解嘔吐毒素。

2.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述一級種子培養基包括的原料為：每1000mL，包括胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化鈉3-6g、磷酸氫二鈉2.5-4g、七水硫酸鎂0.5-1.5g，蒸餾水1000mL，pH為7.0-7.4。

3.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述二級種子培養基的原料按質量百分比為：葡萄糖0.5％-3％，酵母抽提物0.5％-3％，蛋白胨0.5％-5％，磷酸氫二鉀0.02％-0.05％，氯化鈉0.5％-1％，硫酸鎂0.02％-0.1％，培養基pH為6.5-7.5。

4.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述發酵培養基的原料按質量百分比為：葡萄糖0.5％-3.0％，豆粕1％-4％，玉米漿1％-3％，酵母粉1％-3％，蛋白胨1％-3％，磷酸氫二鉀0.01％-0.05％，硫酸鎂0.1％-0.2％，硫酸錳0.002％，培養基pH為6.5-7.5。

5.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述芽孢桿菌菌種懸濁液濃度為1×10¹⁰-2×10¹¹cfu/mL，將芽孢桿菌菌種懸濁液按照體積百分比1％-5％接種于一級種子培養基中；

將含有一級種子的一級種子培養基按照體積百分比1％-5％接種于二級種子培養基中；

將含有二級種子的二級種子培養基按照體積百分比1％-5％接種于發酵培養基中。

6.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，步驟(1)中所述培養條件為：溫度37℃-40℃，時間16-24h，轉速180-200r/min；

步驟(2)中所述培養條件為：溫度30℃-37℃，時間8-10h，轉速180-200r/min；

步驟(3)中所述發酵培養條件為：發酵溫度為30℃-37℃，時間24-36h，發酵罐罐壓為0.02Mpa-0.05Mpa，轉速180-200r/min。

7.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述發酵培養基裝入量為發酵罐有效容積的50％-70％。