[發明專利]一種芽孢桿菌的發酵方法

有效

• 申請號: 201810054908.9
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108034616B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 馬秋剛;趙麗紅;計成;郭永鵬;鄭文革
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

本發明公開了屬于微生物發酵技術領域的一種芽孢桿菌的發酵方法。芽孢桿菌經一、二級種子擴大培養后接入發酵培養基中培養，期間通過補料流加碳源和發酵培養基中相對缺乏的限制性氨基酸，經噴霧干燥得到的每克菌粉芽孢桿菌CFU不少于2.3×10¹¹個，芽孢率大于93％，增加了芽孢桿菌的數量和芽孢轉化率，顯著提高單位產量，并降低單位成本。枯草芽孢桿菌ANSB01G用于玉米赤霉烯酮的降解，48h后體系中玉米赤霉烯酮的降解率可達到92％。

技術領域

本發明屬于微生物發酵技術領域，具體涉及一種芽孢桿菌的發酵方法。

背景技術

玉米赤霉烯酮(ZEN)又稱F-2毒素，是一類2，4-二羥基苯甲酸的內酯化合物，具有類雌性激素作用，可與子宮內雌激素受體不可逆結合，從而影響動物的生殖生理。玉米赤霉烯酮對畜牧業及人類產生嚴重的危害，因此，有效控制和解決ZEN對糧食和飼料的污染，對改善動物生產性能和提高人類食品安全有非常重要的意義。科學工作者們對該毒素的解毒去除方法進行了不斷研究，總結國內外研究者關于ZEN除毒去毒方法，主要包括物理去毒法、化學去毒法和微生物及生物酶降解法。傳統的理化方法對ZEN去毒均不理想，從而限制了在實際生產中的應用。

申請公布號為CN102181376A的發明專利公開了一種同時降解玉米赤霉烯酮和纖維素的枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis ANSB01G(保藏編號為CGMCC No.4297)。并公開其培養方法為，取活菌濃度為10⁹CFU/ml的枯草芽孢桿菌0.5-2.5ml，接種于50-100ml培養基中，在30-40℃進行搖瓶發酵培養20-30h，轉速180-220r/min，pH值7.0-7.4。取枯草芽孢桿菌的發酵液600-800μl，加入500ppb的玉米赤霉烯酮150-200μl，將反應體系的pH值調節為7.0-7.4，在36-38℃反應2-72h，枯草芽孢桿菌ANSB01G對玉米赤霉烯酮的降解率達到83％。

申請公開號為CN104232526A的發明專利公開了一種枯草芽孢桿菌活菌制劑的制備工藝，枯草芽孢桿菌ANSB01G活菌制備工藝需要同時兼顧活菌數和玉米赤霉烯酮降解活性，CN104232526A中提供的發酵方法不能滿足枯草芽孢桿菌ANSB01G發揮最佳的玉米赤霉烯酮降解特性。

發明內容

本發明為了解決上述存在的技術問題，提出一種芽孢桿菌的發酵方法。具體技術方案如下：

一種芽孢桿菌的發酵方法，包括如下步驟：

(1)一級種子制備：取芽孢桿菌菌種懸濁液接種于一級種子培養基中，然后進行培養；

(2)二級種子制備：將一級種子接種于二級種子培養基中，然后進行培養；

(3)發酵：將二級種子接種于發酵培養基中，然后進行發酵培養；

當發酵至8-10h時流加補料培養基A，發酵至12-17h時流加補料培養基B；

所述補料培養基A包含質量百分比10％-20％的碳源；

所述補料培養基B包含質量百分比5％-10％的碳源和質量百分比1.8％-9.5％發酵培養基中缺乏的菌種限制性氨基酸。

所述芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌。

所述一級種子培養基包括的原料為：每1000mL，包括胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化鈉3-6g、磷酸氫二鈉2.5-4g、七水硫酸鎂0.5-1.5g，蒸餾水1000mL，pH為7.0-7.4；

所述二級種子培養基包括的原料按質量百分比為：葡萄糖0.5％-3％，酵母抽提物0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，磷酸氫二鉀0.02％-0.05％，氯化鈉0.5％-1％，硫酸鎂0.02％-0.1％，培養基pH為6.5-7.5；