[發明專利]一種芽孢桿菌的發酵方法

有效

• 申請號: 201810054908.9
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108034616B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 馬秋剛;趙麗紅;計成;郭永鵬;鄭文革
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

1.一種芽孢桿菌的發酵方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）一級種子制備：取芽孢桿菌菌種懸濁液接種于一級種子培養基中，然后進行培養；

（2）二級種子制備：將一級種子接種于二級種子培養基中，然后進行培養；

（3）發酵：將二級種子接種于發酵培養基中，然后進行發酵培養；

當發酵至8-10h時流加補料培養基A，發酵至12-17h時流加補料培養基B；

所述補料培養基A包含質量百分比10%-20%的碳源；

所述補料培養基B包含質量百分比5%-10%的碳源和質量百分比1.8%-9.5%發酵培養基中缺乏的菌種限制性氨基酸；

所述補料培養基A和補料培養基B的流加量均為發酵培養基體積的0.1-1.0‰；所述碳源為葡萄糖，所述發酵培養基中缺乏的菌種限制性氨基酸為賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸和精氨酸；

所述補料培養基A的的原料及用量為：葡萄糖10%-20%，培養基pH為6.5-7.5；

所述補料培養基B的原料及用量為：葡萄糖5%-10%，賴氨酸1.0%-4.0%，苯丙氨酸0.5%-3.0%，蛋氨酸0.2%-1.5%，精氨酸0.1%-1.0%，培養基pH為6.5-7.5；

所述芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis ）ANSB01G；所述芽孢桿菌能夠降解玉米赤霉烯酮。

2.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述一級種子培養基的原料為：胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化鈉3-6g、磷酸氫二鈉2.5-4g、七水硫酸鎂0.5-1.5g，蒸餾水1000mL，pH為7.0-7.4。

3.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述二級種子培養基的原料按質量百分比為：葡萄糖0.5%-3%，酵母抽提物0.5%-3%，蛋白胨0.5%-3%，磷酸氫二鉀0.02%-0.05%，氯化鈉0.5%-1%，硫酸鎂0.02%-0.1%，培養基 pH為6.5-7.5。

4.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述發酵培養基的原料按質量百分比為：葡萄糖0.5%-2.5%，豆粕 1.5%-4%，玉米漿1%-5%，酵母粉1%-3%，蛋白胨1%-3%，磷酸氫二鉀0.01%-0.05%，硫酸鎂0.1%-0.2%，硫酸錳0.002%，培養基pH為6.5-7.5。

5.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述芽孢桿菌菌種懸濁液濃度為1×10¹⁰-2×10¹¹cfu/mL，將芽孢桿菌菌種懸濁液按照體積百分比1%-5%接種于一級種子培養基中；

將含有一級種子的一級種子培養基按照體積百分比1%-5%接種于二級種子培養基中；

將含有二級種子的二級種子培養基按照體積百分比1%-5%接種于發酵培養基中。

6.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，步驟（1）中所述培養條件為：溫度37℃-40℃，時間16-24h，轉速180-200r/min；

步驟（2）中所述培養條件為：溫度30℃-35℃，時間8-10h，轉速180-200r/min；

步驟（3）中所述發酵培養條件為：發酵溫度為30℃-35℃，時間24-36h，發酵罐罐壓為0.02Mpa-0.05Mpa，轉速180-200r/min。

7.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，所述發酵培養基裝入量為發酵罐有效容積的50%-70%。