[發明專利]基于一步巢式qPCR法或一步巢式PCR法檢測病毒用鎖核酸引物及檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201810054853.1 | 申請日： | 2018-01-19 |
| 公開（公告）號： | CN108060216A | 公開（公告）日： | 2018-05-22 |
| 發明（設計）人： | 馬學軍;王佶;張益;申辛欣;何小周 | 申請（專利權）人： | 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686;C12Q1/70;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 劉奇 |
| 地址： | 100000 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 一步 qpcr pcr 檢測 病毒 核酸 引物 試劑盒 | ||
1.基于一步巢式qPCR法或一步巢式PCR法檢測病毒用鎖核酸引物，包括上游外引物和下游外引物，其特征在于，所述上游外引物和下游外引物中分別獨立標記有2～6個LNA單體。
2.根據權利要求1所述的鎖核酸引物，其特征在于，所述LNA單體包括2,-O,4,-C-亞甲基-β-D-呋喃核糖核酸單體。
3.根據權利要求1所述的鎖核酸引物，其特征在于，所述鎖核酸引物中，被LNA單體標記的位點為G或C對應的核糖。
4.根據權利要求1～3任意一項所述的鎖核酸引物，其特征在于，當檢測病毒為腸道病毒時，所述上游外引物為+CY+TT+G+T+G+CGCCTGTTTT；
所述下游外引物為ATT+GT+CA+C+CATAAGCAGCC；
所述+C、+T或+G表示被LNA單體標記。
5.一種基于一步巢式qPCR法或一步巢式PCR法檢測病毒的試劑盒，包括內引物和權利要求1～4任意一項所述的鎖核酸引物。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，當檢測腸道病毒時，所述內引物包括上游內引物和下游內引物；
所述上游內引物具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；
所述上游內引物具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述上游內引物和下游內引物的濃度獨立為1～100μmol/L。
8.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述鎖核酸引物中上游外引物和下游外引物的濃度獨立為1～100μmol/L。
9.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，當所述試劑盒基于一步巢式qPCR法檢測時，所述試劑盒還包括探針；
所述探針具有如序列表中SEQ ID No.5所示的核苷酸序列。
10.根據權利要求5～9任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR反應液。
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