[發(fā)明專利]一種提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810052769.6
• 申請(qǐng)日: 2018-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN107988134B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬秋剛;趙麗紅;計(jì)成;李美玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/36
• 分類號(hào): C12N1/36;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

本發(fā)明公開了一種提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法，包括以下步驟：將芽孢桿菌活化；將活化后的菌種依次按照從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基，然后再增加營養(yǎng)物質(zhì)濃度到正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)的順序進(jìn)行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)基根據(jù)濃度設(shè)置3個(gè)以上，連續(xù)傳代3代以上。本發(fā)明提供的提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法，很大程度上縮短了培養(yǎng)馴化時(shí)間，操作簡(jiǎn)單，按照本發(fā)明的方法，可以使芽孢桿菌的產(chǎn)芽孢率提高到96％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的是涉及一種提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法。

背景技術(shù)

隨著微生態(tài)制劑成為飼料添加劑研究的熱點(diǎn)，益生菌制劑在動(dòng)物飼養(yǎng)中的優(yōu)勢(shì)逐步顯現(xiàn)。但是大多數(shù)益生菌存在抗逆性差，不耐熱的缺點(diǎn)，給制劑的保藏、運(yùn)輸都帶來了較大困難。芽孢桿菌是在自然界廣泛存在的一種好氧的產(chǎn)芽孢桿菌，芽孢是細(xì)菌營養(yǎng)體在必需養(yǎng)料即將耗盡時(shí)，在細(xì)胞內(nèi)形成的含水量極低、抗逆性極強(qiáng)的休眠體。

研究表明，芽孢桿菌所產(chǎn)生的芽孢具有耐熱、耐旱、抗紫外線和有機(jī)溶劑等多種抗逆性，由于芽孢極強(qiáng)的抗逆性，在工業(yè)機(jī)械化生產(chǎn)高溫干燥的過程中，可以保證微生物菌劑的活性，提高其產(chǎn)品質(zhì)量，并且其對(duì)人畜無害，不污染環(huán)境，所以在畜牧業(yè)、飼料行業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。目前，從自然生境中篩選得到芽孢桿菌益生菌種在工業(yè)生產(chǎn)過程中普遍存在芽孢形成率不高、應(yīng)用效果不穩(wěn)定等問題。如何提高枯草芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率已經(jīng)成為限制芽孢桿菌微生態(tài)制劑發(fā)展的瓶頸問題之一。

中國專利文獻(xiàn)CN102181389A公開了一種選育高產(chǎn)芽孢率芽孢桿菌的方法，該方法是根據(jù)芽孢的熱穩(wěn)定性特點(diǎn)，采用逐級(jí)加熱處理后培養(yǎng)的手段，選育出高產(chǎn)芽孢率的芽孢桿菌。其步驟包括：芽孢桿菌激活、一級(jí)加熱處理、一級(jí)培養(yǎng)、二級(jí)加熱處理、二級(jí)培養(yǎng)、三級(jí)加熱處理、三級(jí)培養(yǎng)與收集，得到所述高產(chǎn)芽孢率芽孢桿菌。上述方法雖然提高了芽孢桿菌的產(chǎn)芽孢率，但是此方法需要較長的培養(yǎng)時(shí)間，由激活并經(jīng)過三級(jí)培養(yǎng)，每次至少3-5天，培養(yǎng)一次至少需要2周的時(shí)間，拉長了培養(yǎng)馴化的時(shí)間，并且經(jīng)過培養(yǎng)后，還需要進(jìn)行不同程度的熱處理，需要謹(jǐn)慎的設(shè)置溫度和時(shí)間，增加了控制成本。所以建立一種快速、高效并且工藝簡(jiǎn)單的提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法十分必要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的選育高產(chǎn)芽孢率的芽孢桿菌培養(yǎng)時(shí)間長、操作復(fù)雜等問題，提供一種提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法，包括以下步驟：

將芽孢桿菌活化；

將活化后的菌種依次按照從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基，然后再增加營養(yǎng)物質(zhì)濃度到正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)的順序進(jìn)行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)基根據(jù)濃度設(shè)置3個(gè)以上，連續(xù)傳代3代以上。

上述菌種馴化方法中，所述正常培養(yǎng)基為80-100％原始濃度的培養(yǎng)基，所述貧瘠培養(yǎng)基為12.5％-80％原始濃度培養(yǎng)基。

上述菌種馴化方法中，所述從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基再到正常培養(yǎng)基，逐步設(shè)置3-9個(gè)濃度梯度，從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基，后一濃度為前一濃度的12.5％-80％；從貧瘠培養(yǎng)基到正常培養(yǎng)基，前一濃度為后一濃度的12.5％-80％。

上述菌種馴化方法中，所述從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基再到正常培養(yǎng)基，逐步設(shè)置3-7個(gè)濃度梯度，從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基，后一濃度為前一濃度的12.5％-80％；從貧瘠培養(yǎng)基到正常培養(yǎng)基，前一濃度為后一濃度的12.5％-80％。

上述菌種馴化方法中，所述從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基再到正常培養(yǎng)基的順序?yàn)椋涸紳舛扰囵B(yǎng)基、50％原始濃度培養(yǎng)基、25％原始濃度培養(yǎng)基、12.5％原始濃度培養(yǎng)基、25％原始濃度培養(yǎng)基、50％原始濃度培養(yǎng)基、原始濃度培養(yǎng)基。