[發(fā)明專利]一種提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810052769.6
• 申請(qǐng)日: 2018-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN107988134B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬秋剛;趙麗紅;計(jì)成;李美玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/36
• 分類號(hào): C12N1/36;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

1.一種提高芽孢桿菌產(chǎn)芽孢率的菌種馴化方法，其特征在于，包括以下步驟：

將芽孢桿菌活化；

將活化后的菌種依次按照從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基，然后再增加營養(yǎng)物質(zhì)濃度到正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)的順序進(jìn)行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)基根據(jù)濃度設(shè)置3個(gè)以上，連續(xù)傳代3代以上；

所述正常培養(yǎng)基為80-100%原始濃度的培養(yǎng)基，所述貧瘠培養(yǎng)基為12.5%-80%原始濃度培養(yǎng)基；所述從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基再到正常培養(yǎng)基，逐步設(shè)置3-9個(gè)濃度梯度，從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基，后一濃度為前一濃度的12.5%-80%；從貧瘠培養(yǎng)基到正常培養(yǎng)基，前一濃度為后一濃度的12.5%-80%；

在每一代結(jié)束培養(yǎng)后，水浴加熱，然后再進(jìn)行下一次傳代；

所述水浴加熱的方法為：80-100℃，加熱5-20min；

所述芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌（ Bacillus subtilis ） 。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌種馴化方法，其特征在于，所述從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基再到正常培養(yǎng)基，逐步設(shè)置3-7個(gè)濃度梯度，從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基，后一濃度為前一濃度的12.5%-80%；從貧瘠培養(yǎng)基到正常培養(yǎng)基，前一濃度為后一濃度的12.5%-80%。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌種馴化方法，其特征在于，所述從正常培養(yǎng)基到貧瘠培養(yǎng)基再到正常培養(yǎng)基的順序?yàn)椋涸紳舛扰囵B(yǎng)基、50%原始濃度培養(yǎng)基、25%原始濃度培養(yǎng)基、12.5%原始濃度培養(yǎng)基、25%原始濃度培養(yǎng)基、50%原始濃度培養(yǎng)基、原始濃度培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的菌種馴化方法，其特征在于，所述原始濃度培養(yǎng)基為：每1000 mL，包含如下組分：胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化鈉3-6g、磷酸氫二鈉2.5-4g、七水硫酸鎂0.5-1.5g，pH值為7.0-7.4。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌種馴化方法，其特征在于，所述傳代培養(yǎng)的條件為：搖瓶發(fā)酵，發(fā)酵溫度為30-37℃，發(fā)酵時(shí)間為30-48h，轉(zhuǎn)速為180-220 r/min，pH值為7.0-7.4。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的菌種馴化方法，其特征在于，所述發(fā)酵溫度為37℃，發(fā)酵時(shí)間為36h，轉(zhuǎn)速為200r/min，pH值為7.0。