[發明專利]一種小麥白粉菌的LAMP檢測引物組合及其LAMP檢測試劑盒和LAMP方法

有效

• 申請號: 201810052406.2
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108103153B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 薛敏峰;龔雙軍;楊立軍;向禮波;曾凡松;史文琦;喻大昭
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院植保土肥研究所
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

1.一種小麥白粉菌的LAMP檢測引物組合，其特征在于：由正向外引物F3、反向外引物B3、正向內引物FIP和反向內引物BIP組成，各引物序列如下：

FIP：5’- TAAGCAAGAGGCTGTTTGGTCGACCCAGGATGATGTTCTCGGA-3’；

BIP：5’- TCCCTCAGTAAATGGCATTGGCAGGGTTCTTGAGCCTTAGGTAC-3’；

F3： 5’-TTGTCATCAGGGGCTACATTA-3’；

B3： 5’-GCCAACTACAGCTCACAGAG-3’。

2.權利要求1所述引物組合在檢測小麥白粉菌中的應用。

3.一種檢測小麥白粉菌的LAMP試劑盒，其特征在于，包含以下成分：

(1)含權利要求1所述的LAMP檢測引物組合，濃度分別為：正向外引物F3 1μM、反向外引物B3 1μM、正向內引物FIP 8μM和反向內引物FIP 8μM；

(2)反應液及染料，包含：7mMdNTPs、100mMTris-HCl、50mMKCl、50mM(NH4)₂SO₄、40mMMgSO₄、0.5％Triton X-100、5MBetain、40U Bst DNA聚合酶和FDR；

(3)陽性對照為小麥白粉菌的基因組DNA，陰性對照為不含目的基因的反應混合液。

4.權利要求3所述的一種檢測小麥白粉菌的LAMP試劑盒在檢測小麥白粉菌中的應用。

5.一種小麥白粉菌的LAMP方法，其特征在于：提取待測樣品的總DNA，取1μL DNA溶液，加入5μL反應液及染料、5μL如權利要求1所述的LAMP檢測引物組合和14μL滅菌超純水進行LAMP反應，反應程序為65℃，時間為60min，擴增產物進行顏色變化的觀察，顯示橙色表示檢測為陰性，不存在小麥白粉菌，而顯示綠色為陽性，樣品中存在小麥白粉菌；反應液及染料包含：7mMdNTPs、100mMTris-HCl、50mMKCl、50mM(NH4)₂SO₄、40mM MgSO₄、0.5％Triton X-100、5MBetain、40U Bst DNA聚合酶和FDR。