[發明專利]高原特種養殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制備方法

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• 申請號: 201810052257.X
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108396018A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 馮全忠;鄧玉林;孟薇薇;李月海;曲淑華;索文敏;戴榮繼;陳艷;孟世英;胡志成;孫俐麗
• 申請（專利權）人: 青海華杰實業有限公司;北京理工亙元科技有限公司
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進

本發明提供了一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制備方法，涉及生物提取技術領域。上述高原特種養殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制備方法通過將pH為5～7的蛋清加工液加入Na⁺弱酸性陽離子交換樹脂進行吸附處理，并與超濾法相結合進行濃縮除鹽，對蛋清中的溶菌酶進行提取。該方法制得的溶菌酶，其成品酶比活大于30000U/mg，純度大于98％，成品得率大于4‰(蛋清質量)，同時該方法具有提取工藝穩定，可重復性好的優點，有效緩解了現有制備方法提取工藝不穩定以及溶菌酶純度低、酶活力低等問題。

技術領域

本發明涉及生物提取技術領域，尤其是涉及一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制備方法。

背景技術

溶菌酶(lysozyme，簡稱LZM)又稱胞壁質酶(muramidase)或N-乙酰胞壁質聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase)，是作用于微生物細胞壁的一種水解酶。溶菌酶在哺乳動物的淚液、唾液、尿、乳汁等分泌物以及組織(如肝、腎)和白血球內有廣泛分布，以及禽類的蛋清、蛋殼中，無花果、大麥、木瓜和卷心菜等植物中也存在溶菌酶。其中，以禽類蛋蛋清中溶菌酶的含量最高。前期研究表明，高原特種養殖珍禽蛋中的溶菌酶含量較普通雞蛋更高，以高原特種養殖珍禽蛋作為原料提取溶菌酶，可制得高活力的優質溶菌酶，在天然防腐劑市場可形成巨大的競爭力。

溶菌酶可選擇性地水解微生物細胞壁而不破壞其他組織，可作為生物研究中的工具酶，進行原生質體制備、融合育種以及提取細胞內各類物質。此外，根據溶菌酶的溶菌特性，且溶菌酶無毒無害，因此是一種安全性能很好的殺菌劑和防腐劑，被廣泛地應用于醫療制劑、食品防腐等行業，具有較大的應用價值。

隨著人民生活水平的提高和健康意識的增強，食品添加劑及抗生素使用問題日益尖銳，食品、醫藥安全等問題引起了社會的廣泛關注。尋找一種安全性高、抗菌效果好的替代物的研究備受關注。蛋清溶菌酶作為動物自身的一種非特異性免疫因子，無毒無害，對革蘭氏陽性菌及少量革蘭氏陰性菌有顯著的溶菌作用。目前已被廣泛的用于食品保鮮及醫藥等領域。據市場調查顯示，我國溶菌酶供貨量遠低于溶菌酶需求量。國內溶菌酶的市場容量大，其生產具有較廣闊的市場前景。

因此，通過對現有的蛋清溶菌酶的制備方法進行研究，設計出一種能夠適合工業化生產的高原特種養殖珍禽蛋蛋清溶菌酶生產工藝，進而獲得高活力、高純度的蛋清溶菌酶，具有十分廣泛的商業應用前景。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制備方法，所述方法制得的溶菌酶，其成品酶比活大于30000U/mg，純度大于98％，成品得率大于4‰(蛋清質量)，同時該方法具有提取工藝穩定，可重復性好的優點，有效緩解了現有制備方法提取工藝不穩定以及溶菌酶純度低、酶活力低等問題。

本發明提供的，一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清溶菌酶的制備方法，所述方法包括以下步驟：

(a)蛋清預處理：首先，分離蛋黃蛋清后將蛋清直接進行均質處理，隨后過濾去雜并將蛋清的pH調節至5～7，得到蛋清加工液；

(b)吸附與洗脫處理：在蛋清加工液中加入Na⁺弱酸性陽離子交換樹脂進行攪拌吸附2～4h，隨后用去離子水清洗樹脂，至洗出液的OD281值≤0.005，得到吸附后樹脂，然后用氯化鈉溶液對吸附后樹脂進行洗脫，收集洗脫液，得到洗脫后溶液；

(c)超濾濃縮：將洗脫后溶液進行濃縮超濾處理至原體積的0.08～0.15，得到超濾濃縮液，隨后對超濾濃縮液進行除鹽超濾處理，直至處理后的超濾透過液中氯離子濃度為0.001～0.003mol/L時結束超濾操作，并對超濾透過液進行干燥，得到蛋清溶菌酶。

進一步的，所述步驟(a)均質處理的均質條件為200～400rpm，均質時間為20～30min。