[發明專利]高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法

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• 申請號: 201810051155.6
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108535206A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 馮全忠;鄧玉林;孟薇薇;李月海;曲淑華;索文敏;戴榮繼;陳艷;孟世英;胡志成;孫俐麗
• 申請（專利權）人: 青海華杰實業有限公司;北京理工亙元科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進

本發明公開了一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，涉及溶菌酶分析檢測技術領域。所述檢測方法包括：(a)建立溶菌酶標準曲線：采用0.05?0.08mol/L pH＝6.0?6.5的磷酸鹽緩沖液將溶菌酶標準品溶解并稀釋成不同濃度梯度，通過紫外分光光度法在279?283nm波長處測定吸光度值；(b)檢測樣品：取待測珍禽蛋蛋清樣品用磷酸鹽緩沖液稀釋，按照與標準品相同的方式分析，測定檢測樣品的吸光度值，根據所述吸光度值由標準曲線計算待測珍禽蛋蛋清樣品中溶菌酶含量。本發明采用低濃度磷酸鹽緩沖液體系使溶菌酶的測定結果更加準確，且精密度更好，靈敏度高，回收率更高，適用于高原特種養殖珍禽蛋溶菌酶測定。

技術領域

本發明涉及溶菌酶分析檢測技術領域，具體而言，涉及一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法。

背景技術

溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質酶(muramidase)或N-乙酰胞壁質聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase)，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。溶菌酶主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

溶菌酶廣泛存在于人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中，其中以蛋清含量最為豐富。

GBT 25879-2010中記載了雞蛋蛋清中溶菌酶的測定方法，具體包括：溶菌酶用0.9％氯化鈉稀釋成不同梯度濃度(例如0、0.2、0.4、0.8、1mg/mL)，以溶菌酶工作液濃度為橫坐標，281nm波長處吸光度為縱坐標繪制標準曲線，并求出回歸方程。然后將蛋清用0.9％氯化鈉稀釋，乙酸調溶液至pH4.5，77℃水浴10min后取出，靜置1h，離心取上清，按照標準曲線繪制的操作測得OD₂₈₁值，由標準曲線回歸方程計算蛋清溶液中溶菌酶的含量，再乘以稀釋倍數即為蛋清中溶菌酶的含量。

前期研究表明，以高原地區特種養殖的珍禽蛋作為原料提取溶菌酶，可制得高活力的優質溶菌酶，在天然防腐劑市場可形成巨大的競爭力。

傳統方法采用0.9％氯化鈉作為體系的稀釋溶液，鹽濃度過高，容易影響溶菌酶含量測定的準確性，后期需要調節體系pH，操作繁瑣，造成測定結果不準確。同時，該方法是一種普適方法，而高原地區特種養殖的珍禽蛋中溶菌酶含量較常規蛋類高很多，如果采用該方法測定容易造成結果不準確，目前還沒有一種完全適用于高原特種養殖珍禽蛋中溶菌酶的檢測方法。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，該方法利用分光光度法，采用磷酸鹽緩沖液作為標準品和待測樣品的稀釋溶液，非常適合于高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測，檢測精密度好、準確度高。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

本發明提供了一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，包括以下步驟：

(a)建立溶菌酶標準曲線：采用pH＝6.0-6.5的磷酸鹽緩沖液將溶菌酶標準品溶解并稀釋成不同濃度梯度，通過紫外分光光度法在279-283nm波長處測定吸光度值，建立溶菌酶標準曲線；

(b)檢測樣品：取待測珍禽蛋蛋清樣品用所述磷酸鹽緩沖液稀釋，按照與標準品相同的分析方式測定檢測樣品的吸光度值，根據所述吸光度值由標準曲線計算待測珍禽蛋蛋清樣品中溶菌酶含量；

其中，磷酸鹽緩沖液的濃度為0.05-0.08mol/L。