[發明專利]高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法

在審

• 申請號: 201810051155.6
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108535206A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 馮全忠;鄧玉林;孟薇薇;李月海;曲淑華;索文敏;戴榮繼;陳艷;孟世英;胡志成;孫俐麗
• 申請（專利權）人: 青海華杰實業有限公司;北京理工亙元科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進

1.一種高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)建立溶菌酶標準曲線：采用pH＝6.0-6.5的磷酸鹽緩沖液將溶菌酶標準品溶解并稀釋成不同濃度梯度，通過紫外分光光度法在279-283nm波長處測定吸光度值，建立溶菌酶標準曲線；

(b)檢測樣品：取待測珍禽蛋蛋清樣品用所述磷酸鹽緩沖液稀釋，按照與標準品相同的分析方式測定檢測樣品的吸光度值，根據所述吸光度值由標準曲線計算待測珍禽蛋蛋清樣品中溶菌酶含量；

其中，磷酸鹽緩沖液的濃度為0.05-0.08mol/L。

2.按照權利要求1所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，磷酸鹽緩沖液的pH為6.0-6.2，和/或，磷酸鹽緩沖液的濃度為0.06-0.08mol/L。

3.按照權利要求1所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，磷酸鹽緩沖液的pH為6.0-6.2，和/或，磷酸鹽緩沖液的濃度為1/15-1/14mol/L。

4.按照權利要求1-3任一項所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，步驟(a)中在280-282nm波長處測定吸光度值，優選在281nm波長處測定吸光度值。

5.按照權利要求1-3任一項所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，磷酸鹽緩沖液的配制包括以下步驟：

每15-25mL的1/15-1/14mol/L Na₂HPO₄溶液與75-85mL的1/15-1/14mol/L NaH₂PO₄溶液混合。

6.按照權利要求1-3任一項所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，步驟(a)中溶菌酶標準品溶解后的濃度為300-800μg/mL，優選400-600μg/mL，進一步優選400-500μg/mL。

7.按照權利要求6所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，溶解后將溶菌酶標準品分別稀釋20倍、10倍、20/3倍、5倍、4倍和10/3倍，得到不同濃度梯度工作液，并以磷酸鹽緩沖液為參比液建立溶菌酶標準曲線。

8.按照權利要求1-3任一項所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，步驟(b)中待測珍禽蛋蛋清樣品用磷酸鹽緩沖液稀釋100-500倍，優選稀釋200-400倍，進一步優選稀釋200-300倍。

9.按照權利要求1-3任一項所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，高原特種養殖珍禽蛋包括在高原散養并飼喂純天然植物飼料的中華黑白鳳烏骨雞蛋、貴妃雞蛋、珍珠雞蛋、鴨蛋、鵪鶉蛋或大雁蛋。

10.按照權利要求1-3任一項所述的高原特種養殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)配制磷酸鹽緩沖液：每15-25mL的1/15-1/14mol/L Na₂HPO₄溶液與75-85mL的1/15-1/14mol/L NaH₂PO₄溶液混合，得到1/15-1/14mol/L pH＝6.0-6.5的磷酸鹽緩沖液；

(b)配制溶菌酶標準工作液：稱取溶菌酶標準品，用所述磷酸鹽緩沖液溶解成400-500μg/mL的溶菌酶標準工作液，于4-6℃密封保存備用；

(c)建立溶菌酶標準曲線：采用所述磷酸鹽緩沖液將溶菌酶標準工作液分別稀釋20倍、10倍、20/3倍、5倍、4倍和10/3倍，得到不同濃度梯度工作液，以磷酸鹽緩沖液為參比液，通過紫外分光光度法在281nm波長處測定吸光度值，以工作液濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，求出標準曲線回歸方程；

(d)檢測樣品：取待測珍禽蛋蛋清樣品，用3-5層紗布過濾，取過濾試樣，用所述磷酸鹽緩沖液稀釋200-300倍，得到試樣溶液，按照繪制標準曲線的操作步驟，在波長281nm處測定試樣溶液吸光度值，平行測定三次，取結果的算術平均值，由標準曲線回歸方程計算試樣溶液中溶菌酶的濃度。