[發明專利]用于轉基因番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的引物組、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201810050672.1
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN107988418B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 謝家建;彭于發
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

本發明提供一種用于檢測轉基因番木瓜YK16?0?1轉化體純雜合的引物組，屬于生物技術領域。所述引物組包括以下三條引物：1601?GF：5’?AGAGAACATCTGGTGGTATC?3’，1601?TR：5’?CTCATTAAACTCCAGAAACC?3’，1601?GR：5’?AGACATATATCATCAAGACCATAGTAG?3’。本發明還提供基于上述引物組的試劑盒、檢測方法。本發明所提供的引物組可檢測待測番木瓜個體材料中是否含有YK16?0?1轉化體，并鑒別出該品種中特定個體的純雜合狀態，適合于純合度檢測和育種選種。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種用于轉基因番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的引物組、試劑盒及方法。

背景技術

轉基因番木瓜是目前我國種植的兩種主要轉基因作物之一，2016年我國轉基因番木瓜種植面積為8550公頃，比2015年的7000公頃增加了22％。

轉基因番木瓜YK16-0-1是1996年葉東錫等人將番木瓜環斑病毒(PRSV)的外殼蛋白基因通過農桿菌介導的方法導入到番木瓜基因組中所獲得的，能夠產生對番木瓜環斑病毒的良好抗性。2012年對深圳市市售的轉基因番木瓜檢測表明，57份番木瓜樣品中，轉基因陽性率為91.2％，其中，YK16-0-1品系占96.1％。說明在我國轉基因番木瓜中YK16-0-1轉化體已有較大范圍的種植和銷售。

轉基因性狀與其他生物性狀一樣，可以根據其自交或雜交產生后代中的分離情況來判定其是純合或雜合。在育種過程中，獲得純合體是一個非常關鍵的步驟，也是保證種子質量的重要的因素。傳統的區分轉基因植株純雜合方法是通過檢測自交產生的子一代是否發生分離以及計算分離比進行的，不僅耗時費力，而且浪費了子一代的寶貴資源。而快速高效地篩選純合植株，可顯著加快轉基因植株的育種進程，因此鑒別轉基因植株純雜合方法具有重要的應用價值。

本領域亟需開發一套可快速、高效、便捷地鑒定篩選轉基因番木瓜YK16-0-1純雜合的方法。

發明內容

鑒于本領域存在的上述問題和需求，本發明分析了YK16-0-1轉化體插入位點的番木瓜基因組序列，設計和驗證了特異性的引物組合，建立了快速鑒定YK16-0-1轉化體純雜合的方法，可檢測待測番木瓜材料是YK16-0-1轉化體，并鑒別出特定個體的純雜合狀態。

本發明提供的技術方案如下：

用于番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的引物組，其特征在于，包括以下三條引物：

1601-GF：5’-AGAGAACATCTGGTGGTATC-3’，

1601-TR：5’-CTCATTAAACTCCAGAAACC-3’，

1601-GR：5’-AGACATATATCATCAAGACCATAGTAG-3’。

用于番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組。

所述試劑盒還包括用于進行PCR擴增的常規試劑，和/或，用于進行電泳檢測的常規試劑。

所述用于進行PCR擴增的常規試劑包括：dNTP、DNA聚合酶、PCR緩沖液、超純水，或包含上述物質的商品化PCR反應混合液；所述用于進行電泳檢測的常規試劑包括：電泳緩沖液、核酸染料、瓊脂糖凝膠；

所述用于進行電泳檢測的常規試劑還包括DNA Marker；所述核酸染料指溴化乙錠；所述商品化PCR反應混合液指Go GreenMaster Mix。

用于番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的方法，其特征在于，包括：采用所述的引物組，和/或，所述的試劑盒對待測番木瓜材料的DNA進行PCR擴增。