[發明專利]用于轉基因番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的引物組、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201810050672.1
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN107988418B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 謝家建;彭于發
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

1.用于番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的引物組，其特征在于，由以下三條引物組成：

1601-GF：5’-AGAGAACATCTGGTGGTATC-3’，

1601-TR：5’-CTCATTAAACTCCAGAAACC-3’，

1601-GR：5’-AGACATATATCATCAAGACCATAGTAG-3’。

2.用于番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于進行PCR擴增的常規試劑，和/或，用于進行電泳檢測的常規試劑。

4.根據權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，所述用于進行PCR擴增的常規試劑包括：dNTP、DNA聚合酶、PCR緩沖液、超純水，或包含上述物質的商品化PCR反應混合液；

所述用于進行電泳檢測的常規試劑包括：電泳緩沖液、核酸染料、瓊脂糖凝膠。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述用于進行電泳檢測的常規試劑還包括DNA Marker；所述核酸染料指溴化乙錠；所述商品化PCR反應混合液指GreenMaster Mix。

6.用于番木瓜YK16-0-1轉化體純雜合鑒定的方法，其特征在于，包括：采用權利要求1所述的引物組，和/或，權利要求2-5任一所述的試劑盒對待測番木瓜材料的DNA進行PCR擴增。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系為：GreenMaster Mix 0.5μL/μL，引物0.5μmol/L，所述待測番木瓜材料的DNA模板0.1μL/μL，其余為超純水；

所述PCR擴增的反應程序：95℃預變性4min，以95℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s為1個循環，共進行35個循環，72℃保溫10min。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，還包括：將所述PCR擴增結果進行電泳檢測，判讀電泳檢測結果。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述電泳指：將PCR擴增產物置于質量體積比為0.8％的瓊脂糖凝膠上，于120V電壓下電泳20分鐘；

所述判讀電泳檢測結果指：如果電泳結果僅出現300bp的條帶，則待測的番木瓜材料樣品含有純合的YK16-0-1轉化體；

如果電泳結果同時出現300bp和202bp的條帶，則待測的番木瓜材料樣品含有雜合的YK16-0-1轉化體；

如果電泳結果僅出現202bp的條帶，則待測的番木瓜材料樣品不含有YK16-0-1轉化體。

10.權利要求1所述的引物組在制備番木瓜YK16-0-1轉化體檢測試劑方面的用途，其特征在于，在標有番木瓜YK16-0-1轉化體檢測用途的商品包裝盒內放入如SEQ NO.ID 1-3所示的3條引物。