[發明專利]一種中藥飲片卡那霉素抗體的配方及制備工藝

在審

• 申請號: 201810050175.1
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108727501A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 孟敏
• 申請（專利權）人: 孟敏
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44
• 代理公司: 北京華際知識產權代理有限公司 11676
• 代理人: 褚慶森

1.一種中藥飲片卡那霉素抗體的配方，其特征在于，按照重量份數由如下原料組成：

硫酸卡那霉素58-80份、牛血清白蛋白5-25份、卵清白蛋白3-5份、弗氏完全佐劑3-5份、弗氏不完全佐劑3-5份、碳二亞胺3-5份、戊二醛1-2份、羊抗鼠酶標二抗1-3份、磷酸氫二鈉2-3份、醋酸鈉8-10份、十二烷基磺酸鈉15-20份、考馬斯亮藍R-25010-15份、過氧化脲8-12份、乙醇6-11份、甲醛5-7份、硼氫化鈉8-13份、甲醇1-3份、濃硫酸1-3份、磷酸鹽緩沖液5-7毫升、包被用碳酸鹽緩沖液CBS0.5升、洗滌液PBST0.5升、封閉液5％豬血清0.25升，ELISA試驗顯色液0.5升、ELISA試驗終止液1升。

2.根據權利要求1所述的一種中藥飲片卡那霉素抗體的配方，其特征在于，所述ELISA試驗顯色液必須現用現配，由兩種試劑(試劑一、試劑二)等體積混合而成；

試劑一：取150mL0.1mol的檸檬酸與850mL等摩爾濃度的醋酸鈉混合，在此混合液中加入0.5g的過氧化脲，充分溶解后再在混合液中加入0.08g非那西汀，混勻，于4℃保存。

試劑二：準確稱取1.27g四甲基聯苯胺，加熱攪拌使其充分溶于甲醇溶液中，再將混合液加入500mL甘油中，充分混合4℃保存備用。

3.根據權利要求1所述的一種中藥飲片卡那霉素抗體的配方，其特征在于，所述ELISA試驗終止液配置：取約43mL濃硫酸，緩慢加入356.5mL去離子水中邊加邊攪拌，制成2mol/L的硫酸溶液，室溫保存備用。

4.根據權利要求1所述的一種中藥飲片卡那霉素抗體的配方，其特征在于，所述封閉液5％豬血清在4℃條件下保存備用。

5.根據權利要求1所述的一種中藥飲片卡那霉素抗體的配方，其特征在于，所述乙醇的純度為30％。

6.一種中藥飲片卡那霉素抗體的制備工藝，其特征在于，包括如下步驟：

(1)準確稱取牛血清白蛋白20mg，碳二亞胺55mg，使之充分溶解于2mL0.01M的PBS中，得到反應液為A液；

(2)按配方進行配料，準確稱取卡那霉素標準品50mg，加入1.5mL0.01M的PBS中，邊加邊攪拌，使之充分溶解后所得溶液稱為B液；

(3)將上述B液逐滴加入A液中(邊加入邊攪拌)，密封，避光，在4℃下攪拌過夜；

(4)待上述反應完后，將反應液轉移到處理好的透析袋中，在4℃環境下用0.01M的PBS透析3天。

7.根據權利要求6所述的一種中藥飲片卡那霉素抗體的制備工藝，其特征在于，所述步驟(1)中，反應液在0.01M的PBS中在4℃環境下避光攪拌反應6h。

8.根據權利要求6所述的一種中藥飲片卡那霉素抗體的制備工藝，其特征在于，所述步驟(4)中，反應液的透析分為四段，恒溫透析、換液透析、和降溫透析。

9.根據權利要求6所述的一種中藥飲片卡那霉素抗體的制備工藝，其特征在于，所述恒溫透析是將溫度調至4℃，并保持恒定；所述換液透析是指透析液需要每間隔一定的時間進行換液，在透析第一天每3h換液一次，以后每8-10h換液一次；所述降溫透析是指在透析完成后，將偶聯產物分裝于1.5ml離心管中，將溫度降至-20℃保存備用。