[發明專利]一種咪康唑中間體的生物合成方法

在審

• 申請號: 201810049746.X
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108396040A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 唐云平;丁國芳;余方苗;楊最素;黃芳芳
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 翁霽明

一種咪康唑中間體的生物合成方法，其特征在于所述的生物合成方法是利用實驗室所具有的羰基還原酶酶庫中的羰基還原酶對底物2?氯?1?(2,4?二氯苯基)乙酮進行催化制備高手性ee值(ee＞99)的咪康唑中間體[(R)?2?氯?1?(2,4?二氯苯基)乙醇]；所述的羰基還原酶為Candida macedoniensis AKU 4588；羰基還原酶的添加量為20?100U/L；催化合成的條件是：在pH 7.6?8.8的緩沖液中，于溫度30?40℃、Zn2+存在條件下催化底物2?氯?1?(2,4?二氯苯基)乙酮反應合成咪康唑中間體[(R)?2?氯?1?(2,4?二氯苯基)乙醇]；本發明主要是替代傳統的化學合成方法，減少生產成本及對環境的污染，利用生物酶催化法制備高手性ee值(ee＞99)的咪康唑中間體。

技術領域

本發明涉及的是一種咪康唑中間體的生物合成方法，屬于生物催化技術領域。

背景技術

咪康唑是高效、安全、廣譜抗真菌藥，對致病性真菌幾乎都有作用。其機理是抑制真菌細胞膜的固醇合成，影響細胞膜通透性，抑制真菌生長，導致死亡。在4 μg/mL以下的濃度可抑制大部分臨床分離的真菌，其中新型隱球菌，念珠菌和粗孢子菌對本品均敏感，皮炎芽生菌和組織胞漿菌對本品高度敏感，但曲霉菌較差。另外，咪康唑對金葡菌和鏈球菌及革蘭陽性球菌和炭疽菌等也有抗菌作用。

(R)-2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙醇是咪康唑化學合成過程中一個重要的中間體。但目前主要以化學合成為主，但該方法需要使用價格昂貴的手性配體(S, S)-TsDPEN和金屬試劑[Ru (p-cymene)Cl2]2，產品收率低，手性ee值不高，化學生產成本大且對環境不優化，不適于規模化生產。(R)-2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙醇的大規模生物制備的方法目前尚未見報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種替代傳統的化學合成方法，減少生產成本及對環境的污染，利用生物酶催化法制備高手性ee值(ee＞99)的咪康唑中間體的生物合成方法。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的，一種咪康唑中間體的生物合成方法，所述的生物合成方法是利用實驗室所具有的羰基還原酶酶庫中的羰基還原酶對底物2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙酮進行催化制備高手性ee值(ee＞99)的咪康唑中間體[(R)-2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙醇]。

作為優選：所述的羰基還原酶為Candida macedoniensis AKU 4588；羰基還原酶的添加量為20-100U/L；催化合成的條件是：在pH 7.6-8.8的緩沖液中，于溫度30-40℃、Zn2+存在條件下催化底物2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙酮反應合成咪康唑中間體[(R)-2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙醇]。

作為優選：所述的緩沖液為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS)、0.1mol/LTris-HCl緩沖液或者是0.1mol/L三乙醇胺緩沖液(TEA)；所述Zn2+濃度為1mmol/L；所述底物2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙酮的濃度為1-5g/L；反應合成的時間為4-10h。

利用實驗室所具有的羰基還原酶酶庫，對底物2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙酮進行催化；通過薄層層析色譜和手性高效液相色譜對產物進行手性值分析，獲得具有高手性ee值(ee＞99)的酶種并對該酶進行重組表達；利用該酶催化2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙酮，小規模制備(R)-2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙醇。

具體實施方式

下面將結合具體實施例對本發明作詳細的介紹：本發明所述的一種咪康唑中間體的生物合成方法，所述的生物合成方法是利用實驗室所具有的羰基還原酶酶庫中的羰基還原酶對底物2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙酮進行催化制備高手性ee值(ee＞99)的咪康唑中間體[(R)-2-氯-1-(2, 4-二氯苯基)乙醇]。