[發明專利]一種LRP4抗體細胞包被微孔板制備方法有效
| 申請號： | 201810048828.2 | 申請日： | 2018-01-18 |
| 公開（公告）號： | CN108387723B | 公開（公告）日： | 2019-06-25 |
| 發明（設計）人： | 陳志國;笪宇威;雷霖 | 申請（專利權）人： | 首都醫科大學宣武醫院 |
| 主分類號： | G01N33/533 | 分類號： | G01N33/533;C12N5/10;C12N15/867;C12N15/12 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 劉奇 |
| 地址： | 100000*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 體細胞 微孔板 包被 免疫熒光檢測 試劑盒 重組細胞 制備 細胞培養 檢測技術領域 陽性對照品 樣品稀釋液 細胞包被 細胞接種 質粒轉染 封閉液 檢測 二抗 重復 | ||
【權利要求書】：
1.一種LRP4抗體細胞包被微孔板的制備方法，包括以下步驟：
1)提供LRP4-GFP-HEK293T重組細胞和EGFP-HEK293T重組細胞：
A)將攜帶GFP基因的重組LRP4全長DNA片段和表達EGFP基因的DNA片段分別重組到慢病毒載體pFUGW-H1中，獲得pFUGW-LRP4-GFP重組病毒和pFUGW-EGFP重組病毒；所述重組LRP4全長DNA片段的具體序列如Seq ID No.1所示；
B)將獲得pFUGW-LRP4-GFP重組病毒和pFUGW-EGFP重組病毒分別轉染到HEK293細胞，分別獲得LRP4-GFP-HEK293T重組細胞和EGFP-HEK293T重組細胞；采用流式細胞學篩選方法分別純化LRP4-GFP-HEK293T重組細胞和EGFP-HEK293T重組細胞；
2)分別將所述LRP4-GFP-HEK293T重組細胞和EGFP-HEK293T重組細胞以行為單位，交替放于每行微孔中用固定液固定、加入細胞凍存液后置于-80～-200℃保存；
所述重組細胞的接種密度為0.8～1.2×105/孔；
所述固定液為質量濃度3～5％的多聚甲醛；
所述固定的時間為8～12min；
所述細胞凍存液為DMSO液；所述DMSO液中胎牛血清FBS：DMSO為9:1。
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