[發明專利]用于檢測微生物感染的染色劑組合物及其制備方法

在審

• 申請號: 201810048667.7
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108148887A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 閆文廣
• 申請（專利權）人: 陜西高源體外診斷試劑有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝;余曉文

本申請涉及微生物檢測領域。具體地，本申請提供了用于檢測微生物感染和受試者的組織中的炎性病變的染色劑組合物及其制備方法，還提供了包含這種染色劑組合物的試劑盒。這種染色劑組合物包含品紅、亞甲基藍、鹽酸、糖類還原劑、乙酸、水和選自下組中的任一組或全部：a)亞硫酸鈉，和b)亞硫酸氫鹽和偏重亞硫酸鹽。本申請的染色劑組合物和試劑盒可用于檢測微生物感染，尤其是陰道分泌物中的微生物感染以及受試者的組織中的炎性病變。

技術領域

本發明涉及微生物檢測領域。具體地，本申請提供了用于檢測微生物感染的染色劑組合物及其制備方法，還提供了包含這種染色劑組合物的試劑盒。本申請的染色劑組合物和試劑盒可用于檢測微生物感染，尤其是陰道分泌物中的微生物感染。

背景技術

微生物，例如人體陰道分泌物中的微生物的檢查方法有培養法、涂片顯微鏡檢查、直接熒光免疫法、生化酶法檢測、免疫學檢測、核酸檢測等。培養法是檢查滴蟲、假絲酵母菌等致病微生物最為敏感和特異的方法，但操作麻煩、耗時較長(5天)，難以作為臨床常規檢測方法。

涂片顯微鏡檢查分為生理鹽水和氫氧化鉀試驗后顯微鏡檢查分泌物、染色后顯微鏡檢查。生理鹽水主要用于檢測滴蟲，但受溫度影響較大，此方法的敏感性較差60％-70％^[1，2]；氫氧化鉀實驗主要用于檢測假絲酵母菌，但敏感性較差60％-80％。分泌物染色后顯微鏡檢查，染色的方法有革蘭氏染色、瑞氏染色、亞甲基藍染色。

瑞氏染色使用以下溶劑進行染色：酸性染料：伊紅；堿性染料：亞甲基藍；染料溶劑：甲醇。革蘭氏染色對于假絲酵母菌、細菌類染色比較好，但對于滴蟲的檢測敏感度較低，因為染色后滴蟲的特征性不明顯；瑞氏染色和亞甲基藍染色在觀察上皮細胞方面優勢明顯，在觀察滴蟲和細菌方面與革蘭氏染色無差異。顯微鏡檢查的優點是特異性高，但受主觀因素影響較多。

直接熒光免疫法的靈敏度和特異性均在80％-90％以上，但受診斷人員的主觀影響較大；生化酶法檢測有PH檢測、唾液酸酶、氨基糖甙酶等檢測，這些檢測指標均需要聯合檢測，敏感性和特異性有待提高。

核酸檢測有滴蟲、假絲酵母菌、淋病雙球菌核酸檢測，檢測靈敏度90％以上，特異性90％以上，受技術人員的主觀影響較小，但實驗室須符合PCR 實驗室的要求。

以上陰道分泌物致病微生物的檢測方法均為實驗室檢查，臨床診斷須等待的時間較長，不利于臨床對陰道炎性病變的“即查即治”，如培養法需要5 天以上，核酸檢測需要2小時以上，免疫熒光法需要1小時以上，涂片顯微鏡檢查和生化酶法均需要30分鐘以上。使用瑞氏染色法對陰道分泌物中的微生物進行染色，整個過程需要約半個小時，使用革蘭氏染色法也需要至少約半個小時。

因此，本領域急需一種對微生物，例如陰道分泌物中的微生物通過染色和顏色變化進行檢測的時間短、準確率高、特異性強、操作簡便快捷的染色劑組合物。

發明內容

本發明的發明人發現，可以利用染料對微生物染色來快速檢測來自受試者的樣品中的微生物，例如陰道分泌物中的微生物。基本原理為：首先將品紅和亞甲基藍還原為無色，然后利用微生物氧化品紅和亞甲基藍顯色從而可以檢測出特定的微生物。

本發明提供了一種用于檢測微生物感染的快速染色劑組合物，以解決現有技術中存在的上述問題。本申請的染色劑組合物尤其適用于檢測受試者的陰道分泌物中的微生物。用本發明的這種快速染色劑組合物對樣品進行染色，顯著地提高了檢測微生物的敏感性和特異性，同時操作簡便，在很短的時間，例如數秒，至多不超過1分鐘內就能得到結果，所需要的檢測時間相比于現有技術大幅度縮短，并且不需技術培訓。

因此，本發明提供了一種染色劑組合物，其包含品紅、亞甲基藍、鹽酸、糖類還原劑、乙酸、水和選自下組中的任一組或全部：a)亞硫酸鈉，和b) 亞硫酸氫鹽和偏重亞硫酸鹽，其中各組分具有以下重量百分比：