[發明專利]一種檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810047787.5
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108303415B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 萬宇平;張珊;董益陽;吳小勝;崔娜;張瑜;崔廷婷;趙帥;劉佳蕙;王賽
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司;北京化工大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條及其制備方法和應用。本發明所提供的試紙條包括樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水墊、支撐層及配套試劑，所述配套試劑為納米金標記的黃曲霉毒素B1適配體溶液，所述硝酸纖維素膜上有檢測線和質控線，所述檢測線包被生物素化探針1?鏈霉親和素溶液，所述質控線包被生物素化探針2?鏈霉親和素溶液。本發明的試紙條具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、經濟實用等優點，適用于黃曲霉毒素B1殘留的快速檢測。

技術領域

本發明涉及黃曲霉毒素B1的檢測，具體涉及一種檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條及其制備方法和應用。

技術背景

糧食在儲存、運輸和加工過程中由于溫度和濕度的影響，容易滋生黃曲霉，進而產生黃曲霉毒素(aflatoxin)。黃曲霉毒素(AFT)是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒代謝產物，目前已發現20余種，它們都有致癌作用，其中黃曲霉毒素B1(AFB1)的毒性、致癌性、污染頻率均居于首位，主要作用靶器官是肝臟，有強烈的致癌作用，在1993年被世界衛生組織(WHO)國際癌癥研究機構認定為一級致癌物。AFB1主要存在于谷物、堅果、花生、動物飼料等相關產品中，目前有報道水中也含有黃曲霉毒素。因此，對黃曲霉毒素B1進行快速靈敏檢測是保證食品安全和人們身體健康的有效措施。

目前，黃曲霉毒素B1的檢測方法主要包括酶聯免疫吸附法(ELISA)、免疫親和柱-熒光分光光度計法(SFB)、免疫親和柱-高效液相色譜法(IAC-HPLC)以及高效液相色譜-串聯質譜法(HPLC-MS/MS)等。其中，HPLC法測定準確，分辨率高，可同時測定多種黃曲霉毒素成分，完成定性、定量測定而被廣泛應用，但由于食品樣品中含有大量化合物，需要對測量樣品進行凈化處理以及對毒素進行富集，操作步驟繁瑣，耗時費力，并且儀器價格昂貴，需要專業人員操作，不適合于大批量樣品的檢測；ELISA檢測方法具有特異性強、樣品前處理簡單、成本低、能進行批量檢測等優點，但由于需要酶標儀和操作熟練的人員以及檢測時間相對較長，所以不適合現場快速檢測。因此急需開發新的快速簡單靈敏的黃曲霉毒素B1檢測方法。

納米金標記免疫分析法是近年來迅速發展的一種新型分析技術，其特點是簡便快速、成本低、無污染、無需培訓，非常適合于現場檢測。目前通常將抗體作為生物識別因子，利用抗原抗體的特異性識別進行檢測，但是抗體成本較高，不方便保存，而且制備抗體時需要活體中產生免疫，批次穩定性較差。核酸適配體作為一種新型識別分子，是通過SELEX技術從10¹⁴-10¹⁸文庫中篩選出來的，具有極高的親和力和特異性，與抗體相比，具有易于合成制備、性能穩定、便于修飾等優點，已被用于多種物質的檢測。因此，研制快速、靈敏、高效的黃曲霉毒素B1核酸適配體試紙條對于保障食品安全具有十分重要的意義。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條。

本發明所提供的檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條，包括樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水墊、支撐層及配套試劑；

所述配套試劑為納米金標記的黃曲霉毒素B1適配體溶液，所述黃曲霉毒素B1適配體的核苷酸序列為：5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’，其3’端采用巰基修飾；

所述硝酸纖維素膜上有檢測線和質控線，所述檢測線包被生物素化探針1-鏈霉親和素溶液，所述探針1的核苷酸序列為：5’-GTGGGCCTAGCGAAGGGCACGAGACACAGAGAGACAACACGTGCCCAAC-3’，其3’端標記生物素；所述質控線包被生物素化探針2-鏈霉親和素溶液，所述探針2的核苷酸序列為：5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，其3’端標記生物素。

所述鏈霉親和素為巰基化鏈霉親和素。

所述樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水墊順次固定在所述支撐層上。