[發(fā)明專利]一種檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810047787.5
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108303415B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 萬宇平;張珊;董益陽;吳小勝;崔娜;張瑜;崔廷婷;趙帥;劉佳蕙;王賽
• 申請（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司;北京化工大學(xué)
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
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• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

1）制備納米金標(biāo)記的黃曲霉毒素B1適配體溶液：取適配體干粉，開蓋前先12r/min離心60s，離心后慢慢打開管蓋，加入適量水，使適配體最終濃度為100μmol/L，振蕩10min使其充分溶解；取2mL離心管，分別加入 25μL的100μmol/L的適配體，再向其中加入1μL的10μmol/L的TCEP溶液，于振蕩器上反應(yīng)振蕩，室溫反應(yīng)1h后，使用截留分子量3000的超濾膜進(jìn)行超濾，加入無酶水復(fù)溶至原體積；取上述2mL離心管，加入500μL濃度為1nmol/L的納米金溶液，混勻；再加入2mol/L的檸檬酸三鈉，使檸檬酸三鈉最終濃度為500mmol/L，并調(diào)節(jié)溶液的pH為3；之后加入2μL的100μmol/L的適配體，使得納米金和適配體的比例為1:100，并調(diào)節(jié)最終溶液的pH為7；離心20min，最終沉淀加重懸液復(fù)溶至原體積；其中，所述黃曲霉毒素B1適配體的核苷酸序列為5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’，其3’端采用巰基修飾；所述重懸液為含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.25%牛血清白蛋白、2%蔗糖和0.5%吐溫-20的10mmol/L PBS緩沖液；

2）制備具有包被生物素化探針1-鏈霉親和素溶液的檢測線和包被生物素化探針2-鏈霉親和素溶液的質(zhì)控線的硝酸纖維素膜；所述探針1的核苷酸序列為5’-GTGGGCCTAGCGAAGGGCACGAGACACAGAGAGACAACACGTGCCCAAC-3’，其3’端標(biāo)記生物素；所述探針2的核苷酸序列為5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，其3’端標(biāo)記生物素；所述鏈霉親和素為巰基化鏈霉親和素；

3）將樣品墊置于含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1%牛血清白蛋白、2%蔗糖和0.5%吐溫-20的10mmol/LPBS緩沖液中浸泡2h，37℃烘2h備用；

4）將樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水墊順次固定在支撐層上。

2.由權(quán)利要求1所述的制備方法制備的檢測黃曲霉毒素B1的核酸適配體試紙條在檢測黃曲霉毒素B1中的應(yīng)用。