[發(fā)明專利]一種人的NADH脫氫酶突變蛋白及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810047165.2
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108359648A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張耀洲;吳玉乾;馮建華;李冬梅;張樹軍;胖鐵良;陳玉皎;王文雅
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市湖濱盤古基因科學(xué)發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C07K16/40;C12Q1/6886;C40B40/08;G01N33/535;G01N33/574;G01N33/577
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本發(fā)明涉及一種人的NADH脫氫酶突變蛋白及其應(yīng)用，將大量白血病患者作為研究病例，對病例進(jìn)行基因檢測并分析，確定出人的NADH脫氫酶突變蛋白，根據(jù)該人的NADH脫氫酶突變蛋白制備基因芯片、單克隆抗體和ELISA試劑盒，為人體白血病的基因診斷提供指引作用，實現(xiàn)白血病的診斷和治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基因工程領(lǐng)域，尤其涉及一種人的NADH脫氫酶突變蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide，NADH)脫氫酶又稱為NADH脫氫酶復(fù)合物、NADH:輔酶Q還原酶或復(fù)合體Ⅰ，EC 1.6.5.3)，是一種位于線粒體內(nèi)膜催化電子從NADH傳遞給輔酶Q的酶。此酶是線粒體中氧化磷酸化的“入口酶”。DADH酶與白血病的發(fā)生有密切的關(guān)系，因此，對人的NADH脫氫酶亞基1突變的檢測，對判斷人體的是否患有白血病有一定的指引作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種人的NADH脫氫酶突變蛋白及其應(yīng)用。

本發(fā)明技術(shù)方案包括：

第一方面，提供一種人的NADH脫氫酶突變蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

第二方面，提供一種人的NADH脫氫酶突變蛋白的編碼基因，其核苷酸序列如SEQID NO:2所示。

第三方面，提供一種基因芯片，包括：固相載體和固定在該載體上的核苷酸探針；所述核苷酸探針根據(jù)所述人的NADH脫氫酶突變蛋白的核苷酸序列，與人的NADH脫氫酶正常蛋白的核苷酸序列的比對結(jié)果確定。

優(yōu)選地，所述核苷酸探針為SEQ ID NO:3所示的堿基序列。

第四方面，提供一種特異性識別人的NADH脫氫酶突變蛋白的單克隆抗體，其編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一種用于檢測人的NADH脫氫酶突變蛋白的抗體的ELISA試劑盒，所述ELISA試劑盒包括：包被有上述單克隆抗體的ELISA酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、檢測對象的NADH脫氫酶蛋白、樣品稀釋液、包被緩沖液、ELISA酶標(biāo)板洗滌液、顯色液和終止液。

優(yōu)選地，所述酶標(biāo)二抗為稀釋的HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一種基于上述任一所述ELISA試劑盒檢測人的NADH脫氫酶突變蛋白的抗體的方法，包括：

a、使用所述包被緩沖液對上述單克隆抗體進(jìn)行稀釋，并將稀釋后的所述單克隆抗體加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，并室溫孵育；

b、使用所述樣品稀釋液將檢測對象的NADH脫氫酶蛋白稀釋成不同濃度梯度，并將不同濃度梯度的NADH脫氫酶蛋白分別加樣至ELISA酶標(biāo)板的孔中，并室溫孵育；

c、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

d、加入所述酶標(biāo)二抗，并室溫孵育；

e、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標(biāo)板洗滌液，洗滌并甩干；

f、加入所述顯色液，室溫避光孵育，加入所述終止液終止反應(yīng)；

g、在酶標(biāo)儀上測定波長為450nm處的吸光值。

優(yōu)選地，進(jìn)一步包括：空白對照實驗。

本發(fā)明提供了一種人的NADH脫氫酶突變蛋白及其應(yīng)用，將大量白血病患者作為研究病例，對病例進(jìn)行基因檢測并分析，確定出人的NADH脫氫酶突變蛋白，根據(jù)該人的NADH脫氫酶突變蛋白制備基因芯片、單克隆抗體和ELISA試劑盒，為人體白血病的基因診斷提供指引作用，實現(xiàn)白血病的診斷和治療。