[發明專利]一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法

有效

• 申請號: 201810045154.0
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108279223B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 黃鳳洪;向霞;張珍;鄭明明;夏曉洋;韓領
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 張秋燕

本發明公開了一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，以陽離子聚合物聚(9,9?雙(6'?N,N,N?三甲胺鹽?己烷基)?芴亞苯基)(PFP)為熒光能量供體，通過添加不同量的芥子堿硫氰酸鹽，將吸附在氧化石墨烯表面的熒光素標記的單鏈核酸競爭下來，從而以熒光素標記的單鏈核酸為熒光受體，產生熒光共振能量轉移，熒光信號的變化與芥子堿硫氰酸鹽的添加量呈線性關系，從而實現對芥子堿硫氰酸鹽的檢測。本發明所述檢測芥子堿硫氰酸鹽的方法，采用均相檢測，無需前期預處理步驟，特異性強，靈敏度和準確度高，成本低廉，更加適用于快速科研分析。

技術領域

本發明涉及一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，屬于生物分析檢測技術領域。

背景技術

芥子堿(SP)是十字花科植物中重要的次生代謝產物，廣泛存在于如萊菔子、白芥子等中。具有抗菌、抗氧化、抗輻射、降血壓等生理作用，潛在應用價值巨大。另外，芥子堿的含量也是評價相關植食性產品產品質量的重要指標，所以，發展簡單高效靈敏的芥子堿檢測方法具有重要意義。

對于芥子堿的檢測方法有質譜法、高效液相色譜法、電化學方法、紫外分光光度法等，這些傳統的檢測方法存在樣品預處理復雜、需要依賴專業技術人員及精密儀器、檢測靈敏度低等不足，常常不能滿足研究分析的要求。近來，一些熒光分析方法被開發用于芥子堿的檢測，盡管操作簡單，但存在檢測靈敏度不夠，信噪比低等缺點，所以開發均相、簡單、靈敏度高的芥子堿檢測方法仍具有較高的科學和實用價值。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術存在的不足而提供一種芥子堿硫氰酸鹽熒光檢測方法，可特異性檢測芥子堿硫氰酸鹽，均相操作，無需前期預處理步驟，靈敏度和準確性高。

本發明為解決上述提出的問題所采用的技術方案為：

一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，以聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽離子聚合物為熒光能量供體，通過添加不同量的芥子堿硫氰酸鹽，將吸附在氧化石墨烯表面的熒光素標記的單鏈核酸競爭下來，從而以熒光素標記的單鏈核酸為熒光受體，產生熒光共振能量轉移，熒光信號的變化與芥子堿硫氰酸鹽的添加量呈線性關系，從而實現對芥子堿硫氰酸鹽的檢測。

進一步地，一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，主要包括以下步驟：

(1)配制聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽離子聚合物溶液；配制一系列濃度的芥子堿硫氰酸鹽標準溶液；

(2)將氧化石墨烯溶液、熒光素標記的單鏈核酸(FAM-DNA)、緩沖溶液與等體積不同濃度的芥子堿硫氰酸鹽標準溶液混合，接著加入陽離子聚合物PFP溶液，反應后進行熒光分析，記錄其在300～390nm激發波長下的熒光光譜以及熒光強度F；將芥子堿濃度為0時獲得的熒光強度，記作空白值F₀；

(3)以步驟(2)所得熒光強度變化值△F(F-F₀)為縱坐標，芥子堿硫氰酸鹽的濃度為橫坐標，建立芥子堿硫氰酸鹽濃度的熒光響應標準曲線；

(4)在與步驟(2)平行的條件下測定待測溶液中的熒光強度并扣除空白值F₀后，代入步驟(3)所述標準曲線，從而計算得到待測溶液中芥子堿硫氰酸鹽的濃度。

按上述方案，聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽離子聚合物溶液以水和甲醇為溶劑，PFP的濃度在0.1～5μg/mL范圍內，甲醇和水的體積比在0.08～0.4％范圍內。

按上述方案，所述芥子堿硫氰酸鹽標準溶液的濃度范圍為0～200μg/mL。