[發(fā)明專利]一種基于陽(yáng)離子聚合物檢測(cè)芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810045154.0
• 申請(qǐng)日: 2018-01-17
• 公開（公告）號(hào): CN108279223B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃鳳洪;向霞;張珍;鄭明明;夏曉洋;韓領(lǐng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 張秋燕

本發(fā)明公開了一種基于陽(yáng)離子聚合物檢測(cè)芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測(cè)方法，以陽(yáng)離子聚合物聚(9,9?雙(6'?N,N,N?三甲胺鹽?己烷基)?芴亞苯基)(PFP)為熒光能量供體，通過(guò)添加不同量的芥子堿硫氰酸鹽，將吸附在氧化石墨烯表面的熒光素標(biāo)記的單鏈核酸競(jìng)爭(zhēng)下來(lái)，從而以熒光素標(biāo)記的單鏈核酸為熒光受體，產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，熒光信號(hào)的變化與芥子堿硫氰酸鹽的添加量呈線性關(guān)系，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)芥子堿硫氰酸鹽的檢測(cè)。本發(fā)明所述檢測(cè)芥子堿硫氰酸鹽的方法，采用均相檢測(cè)，無(wú)需前期預(yù)處理步驟，特異性強(qiáng)，靈敏度和準(zhǔn)確度高，成本低廉，更加適用于快速科研分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于陽(yáng)離子聚合物檢測(cè)芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測(cè)方法，屬于生物分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

芥子堿(SP)是十字花科植物中重要的次生代謝產(chǎn)物，廣泛存在于如萊菔子、白芥子等中。具有抗菌、抗氧化、抗輻射、降血壓等生理作用，潛在應(yīng)用價(jià)值巨大。另外，芥子堿的含量也是評(píng)價(jià)相關(guān)植食性產(chǎn)品產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，所以，發(fā)展簡(jiǎn)單高效靈敏的芥子堿檢測(cè)方法具有重要意義。

對(duì)于芥子堿的檢測(cè)方法有質(zhì)譜法、高效液相色譜法、電化學(xué)方法、紫外分光光度法等，這些傳統(tǒng)的檢測(cè)方法存在樣品預(yù)處理復(fù)雜、需要依賴專業(yè)技術(shù)人員及精密儀器、檢測(cè)靈敏度低等不足，常常不能滿足研究分析的要求。近來(lái)，一些熒光分析方法被開發(fā)用于芥子堿的檢測(cè)，盡管操作簡(jiǎn)單，但存在檢測(cè)靈敏度不夠，信噪比低等缺點(diǎn)，所以開發(fā)均相、簡(jiǎn)單、靈敏度高的芥子堿檢測(cè)方法仍具有較高的科學(xué)和實(shí)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足而提供一種芥子堿硫氰酸鹽熒光檢測(cè)方法，可特異性檢測(cè)芥子堿硫氰酸鹽，均相操作，無(wú)需前期預(yù)處理步驟，靈敏度和準(zhǔn)確性高。

本發(fā)明為解決上述提出的問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：

一種基于陽(yáng)離子聚合物檢測(cè)芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測(cè)方法，以聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽(yáng)離子聚合物為熒光能量供體，通過(guò)添加不同量的芥子堿硫氰酸鹽，將吸附在氧化石墨烯表面的熒光素標(biāo)記的單鏈核酸競(jìng)爭(zhēng)下來(lái)，從而以熒光素標(biāo)記的單鏈核酸為熒光受體，產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，熒光信號(hào)的變化與芥子堿硫氰酸鹽的添加量呈線性關(guān)系，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)芥子堿硫氰酸鹽的檢測(cè)。

進(jìn)一步地，一種基于陽(yáng)離子聚合物檢測(cè)芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測(cè)方法，主要包括以下步驟：

(1)配制聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽(yáng)離子聚合物溶液；配制一系列濃度的芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液；

(2)將氧化石墨烯溶液、熒光素標(biāo)記的單鏈核酸(FAM-DNA)、緩沖溶液與等體積不同濃度的芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液混合，接著加入陽(yáng)離子聚合物PFP溶液，反應(yīng)后進(jìn)行熒光分析，記錄其在300～390nm激發(fā)波長(zhǎng)下的熒光光譜以及熒光強(qiáng)度F；將芥子堿濃度為0時(shí)獲得的熒光強(qiáng)度，記作空白值F₀；

(3)以步驟(2)所得熒光強(qiáng)度變化值△F(F-F₀)為縱坐標(biāo)，芥子堿硫氰酸鹽的濃度為橫坐標(biāo)，建立芥子堿硫氰酸鹽濃度的熒光響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(4)在與步驟(2)平行的條件下測(cè)定待測(cè)溶液中的熒光強(qiáng)度并扣除空白值F₀后，代入步驟(3)所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算得到待測(cè)溶液中芥子堿硫氰酸鹽的濃度。

按上述方案，聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽(yáng)離子聚合物溶液以水和甲醇為溶劑，PFP的濃度在0.1～5μg/mL范圍內(nèi)，甲醇和水的體積比在0.08～0.4％范圍內(nèi)。

按上述方案，所述芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為0～200μg/mL。