[發明專利]一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法

有效

• 申請號: 201810045154.0
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108279223B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 黃鳳洪;向霞;張珍;鄭明明;夏曉洋;韓領
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 張秋燕

1.一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于它以聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)陽離子聚合物為熒光能量供體，通過添加不同量的芥子堿硫氰酸鹽，將吸附在氧化石墨烯表面的熒光素標記的單鏈核酸競爭下來，從而以熒光素標記的單鏈核酸為熒光受體，產生熒光共振能量轉移，熒光信號的變化與芥子堿硫氰酸鹽的添加量呈線性關系，從而實現對芥子堿硫氰酸鹽的檢測。

2.一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于主要包括以下步驟：

(1)配制聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽離子聚合物溶液；配制一系列濃度的芥子堿硫氰酸鹽標準溶液；

(2)將氧化石墨烯溶液、熒光素標記的單鏈核酸、緩沖溶液與等體積不同濃度的芥子堿硫氰酸鹽標準溶液混合，接著加入陽離子聚合物聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)溶液，反應后進行熒光分析，記錄其在300～390nm激發波長下的熒光光譜以及熒光強度F；將芥子堿濃度為0時獲得的熒光強度，記作空白值F₀；

(3)以步驟(2)所得熒光強度變化值F-F₀為縱坐標，芥子堿硫氰酸鹽的濃度為橫坐標，建立芥子堿硫氰酸鹽濃度的熒光響應標準曲線；

(4)在與步驟(2)平行的條件下測定待測溶液中的熒光強度并扣除空白值F₀后，代入步驟(3)所述標準曲線，從而計算得到待測溶液中芥子堿硫氰酸鹽的濃度。

3.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)陽離子聚合物溶液以水和甲醇為溶劑，聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)的濃度在0.1～20μg/mL范圍內，甲醇和水的體積比在0.01～2％范圍內。

4.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于所述芥子堿硫氰酸鹽標準溶液的濃度范圍為0～200μg/mL。

5.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于在步驟(2)的熒光分析溶液中，氧化石墨烯濃度范圍為0.1～6μg/mL，熒光素標記的單鏈核酸的濃度范圍為3～30nM，芥子堿硫氰酸鹽的濃度范圍為0～6μg/mL，陽離子聚合物聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)的濃度范圍為0.1～5μg/mL。

6.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于熒光素標記的單鏈核酸具體為5’端標記熒光素FAM的單鏈核酸，序列為：5’-FAM-ACGCATCTGTGAAGAGAACCTGGG-3’。

7.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于所述緩沖溶液為Tris-HCl緩沖溶液，pH范圍在7.0～8.0。

8.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于步驟(2)中，先將氧化石墨烯溶液、熒光素標記的單鏈核酸、緩沖溶液混合反應5～20min后，再與陽離子聚合物PFP溶液混合反應10～30min。

9.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于熒光強度F對應的波長為520～530nm。

10.根據權利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于待測樣品中的基底與芥子堿硫氰酸鹽標準溶液的基底相同即可。