[發(fā)明專利]一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810045154.0 | 申請日: | 2018-01-17 |
| 公開(公告)號: | CN108279223B | 公開(公告)日: | 2020-10-30 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 黃鳳洪;向霞;張珍;鄭明明;夏曉洋;韓領(lǐng) | 申請(專利權(quán))人: | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所 |
| 主分類號: | G01N21/64 | 分類號: | G01N21/64 |
| 代理公司: | 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102 | 代理人: | 張秋燕 |
| 地址: | 430062 湖*** | 國省代碼: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 基于 陽離子 聚合物 檢測 芥子 氰酸鹽 熒光 方法 | ||
1.一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于它以聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)陽離子聚合物為熒光能量供體,通過添加不同量的芥子堿硫氰酸鹽,將吸附在氧化石墨烯表面的熒光素標(biāo)記的單鏈核酸競爭下來,從而以熒光素標(biāo)記的單鏈核酸為熒光受體,產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,熒光信號的變化與芥子堿硫氰酸鹽的添加量呈線性關(guān)系,從而實現(xiàn)對芥子堿硫氰酸鹽的檢測。
2.一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于主要包括以下步驟:
(1)配制聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽離子聚合物溶液;配制一系列濃度的芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液;
(2)將氧化石墨烯溶液、熒光素標(biāo)記的單鏈核酸、緩沖溶液與等體積不同濃度的芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液混合,接著加入陽離子聚合物聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)溶液,反應(yīng)后進行熒光分析,記錄其在300~390nm激發(fā)波長下的熒光光譜以及熒光強度F;將芥子堿濃度為0時獲得的熒光強度,記作空白值F0;
(3)以步驟(2)所得熒光強度變化值F-F0為縱坐標(biāo),芥子堿硫氰酸鹽的濃度為橫坐標(biāo),建立芥子堿硫氰酸鹽濃度的熒光響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(4)在與步驟(2)平行的條件下測定待測溶液中的熒光強度并扣除空白值F0后,代入步驟(3)所述標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而計算得到待測溶液中芥子堿硫氰酸鹽的濃度。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)陽離子聚合物溶液以水和甲醇為溶劑,聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)的濃度在0.1~20μg/mL范圍內(nèi),甲醇和水的體積比在0.01~2%范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于所述芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為0~200μg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于在步驟(2)的熒光分析溶液中,氧化石墨烯濃度范圍為0.1~6μg/mL,熒光素標(biāo)記的單鏈核酸的濃度范圍為3~30nM,芥子堿硫氰酸鹽的濃度范圍為0~6μg/mL,陽離子聚合物聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)的濃度范圍為0.1~5μg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于熒光素標(biāo)記的單鏈核酸具體為5’端標(biāo)記熒光素FAM的單鏈核酸,序列為:5’-FAM-ACGCATCTGTGAAGAGAACCTGGG-3’。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于所述緩沖溶液為Tris-HCl緩沖溶液,pH范圍在7.0~8.0。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于步驟(2)中,先將氧化石墨烯溶液、熒光素標(biāo)記的單鏈核酸、緩沖溶液混合反應(yīng)5~20min后,再與陽離子聚合物PFP溶液混合反應(yīng)10~30min。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于熒光強度F對應(yīng)的波長為520~530nm。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法,其特征在于待測樣品中的基底與芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的基底相同即可。
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