[發(fā)明專利]一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810045154.0
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108279223B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃鳳洪;向霞;張珍;鄭明明;夏曉洋;韓領(lǐng)
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 張秋燕

1.一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于它以聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)陽離子聚合物為熒光能量供體，通過添加不同量的芥子堿硫氰酸鹽，將吸附在氧化石墨烯表面的熒光素標(biāo)記的單鏈核酸競爭下來，從而以熒光素標(biāo)記的單鏈核酸為熒光受體，產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，熒光信號的變化與芥子堿硫氰酸鹽的添加量呈線性關(guān)系，從而實現(xiàn)對芥子堿硫氰酸鹽的檢測。

2.一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于主要包括以下步驟：

(1)配制聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)(PFP)陽離子聚合物溶液；配制一系列濃度的芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液；

(2)將氧化石墨烯溶液、熒光素標(biāo)記的單鏈核酸、緩沖溶液與等體積不同濃度的芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液混合，接著加入陽離子聚合物聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)溶液，反應(yīng)后進行熒光分析，記錄其在300～390nm激發(fā)波長下的熒光光譜以及熒光強度F；將芥子堿濃度為0時獲得的熒光強度，記作空白值F₀；

(3)以步驟(2)所得熒光強度變化值F-F₀為縱坐標(biāo)，芥子堿硫氰酸鹽的濃度為橫坐標(biāo)，建立芥子堿硫氰酸鹽濃度的熒光響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(4)在與步驟(2)平行的條件下測定待測溶液中的熒光強度并扣除空白值F₀后，代入步驟(3)所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計算得到待測溶液中芥子堿硫氰酸鹽的濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)陽離子聚合物溶液以水和甲醇為溶劑，聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)的濃度在0.1～20μg/mL范圍內(nèi)，甲醇和水的體積比在0.01～2％范圍內(nèi)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于所述芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為0～200μg/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于在步驟(2)的熒光分析溶液中，氧化石墨烯濃度范圍為0.1～6μg/mL，熒光素標(biāo)記的單鏈核酸的濃度范圍為3～30nM，芥子堿硫氰酸鹽的濃度范圍為0～6μg/mL，陽離子聚合物聚(9,9-雙(6'-N,N,N-三甲胺鹽-己烷基)-芴亞苯基)的濃度范圍為0.1～5μg/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于熒光素標(biāo)記的單鏈核酸具體為5’端標(biāo)記熒光素FAM的單鏈核酸，序列為：5’-FAM-ACGCATCTGTGAAGAGAACCTGGG-3’。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于所述緩沖溶液為Tris-HCl緩沖溶液，pH范圍在7.0～8.0。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于步驟(2)中，先將氧化石墨烯溶液、熒光素標(biāo)記的單鏈核酸、緩沖溶液混合反應(yīng)5～20min后，再與陽離子聚合物PFP溶液混合反應(yīng)10～30min。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于熒光強度F對應(yīng)的波長為520～530nm。

10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于陽離子聚合物檢測芥子堿硫氰酸鹽的熒光檢測方法，其特征在于待測樣品中的基底與芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的基底相同即可。